TELKOM NIKA Indonesia n  Journal of  Electrical En gineering   Vol. 12, No. 11, Novembe r   2014, pp. 78 0 8  ~ 781 5   DOI: 10.115 9 1 /telkomni ka. v 12i11.62 59          7808     Re cei v ed Ma y 13, 201 4; Revi sed  Jul y  2 2 , 2014; Acce pted Augu st 15, 2014   Resear ch on Protein Thermal Condensation Detection  Based on Phase Mod u lation SPR Imaging      Peng He, Zi-Y ang Ka ng, Xiao-Qing  W a n, Han - Xiong Fang   Coll eg e of Co mmunicati ons  and El ectron ics Engin eeri ng,  Qiqih a r Univ er sit y ,   Qi q i ha r H e il o n g j i a n g  16 10 06 , C h i na      A b st r a ct  A novel SP R i m a g i ng b i o m o l ecul ar inter a tction d e tectio n  meth od  base d  on time d o ma in ph ase   mo du latio n  is prese n ted in t h is thesis. Exp e ri ment al  ap pa ratus of SPR ima g i ng bi o m ol ecul ar interacti o n   detectio n  bas e d  on T D PM is establ ishe d. Biomol ecul ar int e ractio n is det ec ted. 2× 2 lyso z y me array c h ip is   prep ared  and  l yso z y me ther mal con d e n satio n  is detec te d b y  the exper i m e n tal ap par atus. Extracting ph a s e   infor m ati on ch ang es throu gh  the Stoilov a l g o rith m. SPR  curves of the int e ractio n are ob taine d  an d kin e tic   para m eters ar e calcu l ate d . It can sensitiv e l y acqu ir e re al -time p has e chan ge ca use d  by bio m o l ec u l ar  interacti on b a s ed on  interfer e n ce i m a g in g, a nd reso lve  re la ted bio i nfor mation, w h ic h is a  potenti a l too l  for   proteo mics res earch.     Ke y w ords :  su rface plas mon  resona nce (S PR), time do ma in p hase  modu latio n  (T DPM), biomol ec ula r   interacti on, Lys o z y me ther ma l  conde nsati o n     Copy right  ©  2014 In stitu t e o f  Ad van ced  En g i n eerin g and  Scien ce. All  rig h t s reser ve d .       1. Introduc tion  Studies  have  sho w n  that  nea rly 20  kinds  of ne urodeg ene rative disea s e s ,  su ch a s   alzh eime r’s  d i sea s e, famili al amyotro phi c late ra l sclerosi s,  huntin gton’s disea s e,   prio n  di sea s e,  all related  to the  ab normal  coa gulat ion of  prot ei n, dep osit  in  the  co rresp ondin g  tissu e s,  unde rmin ed i t s no rmal  bio l ogical fun c tions [1-4]. T h ere  are lot s   of peo ple  suf f ering f r om t he  dise ase every year, due to the particularity of  diseases, it’s di fficult to cure, affected the  happi ne ss of  itself and the  family, also incre a sed  the b u rde n  of the so ci ety. Nowadays  sci enti s ts  from all over the world a nd releva nt orga niza tion s are actively  study the disea s e, prote i n   con den satio n  proble m  is p a rticul arly pro m inent.  No w mo stly b y  studying  th e me cha n ism  of p r ot ein fol d ing  or  directl y  observed  th e state  of protein a g g reg a tes to e x plain co nde nsatio n ph e n o mena  of the protein,  be cause of the real  stru cture of protein foldi n g is  v e ry  co mplex ,  t he rese ar che r s  h a ve prop ose d  many simp lified  algorith m  mo del, but these algorith m s  model wa s  st ill proved to  be NP-com pl ete probl em[ 5 -6].  Due to th e li mitation of th e time of p r ot ein c oag ulati on, ope ration   method  and t he in strum ent  an d   so o n ，  Direct  obse r vation method exist s   the pro b lem   of  time-con suming, compl i cated ope rati on  and  expen siv e  expe rime ntal eq uipme n t. Then  it  can  be  seen  by  studyin g th e  me cha n ism   of  protein  foldin g an d the  m e thod  of dire ctly ob se rve d  state  of p r o t ein ag gre gat es to  inte rpret  protein  con d e n satio n  phe n o meno n also has ma ny disadvantag es.   SPR (Surfa ce Plasmo n Re son a n c e)  sen s in g tech nology co mp ared  with traditional  detectio n  met hod s, has th e advantag e  of real-tim e a nd fast dete c tion, no use of tag sampl e s,  high sen s itivity, able to testing in the turb id or  op aqu e  sampl e s [7 -9] .  Above all, this pap er i s  put  forwa r d  the  m e thod  ba sed   on SPR ima g i ng d e tectio n.  To g e t the  ch ange  of  refle c ted light  pha se   cau s e d  by protein in the proc ess of co nden se d thro ugh the interf eren ce ima g i ng, analysi s  the  relevant biol o g ical info rmat ion and find t he law of  the  con den satio n  process of protein [10-1 1 ].      2. Materials  and Method s  2.1. The Experimental De v i ce  Experiment  d e vice i s   co nstituted by the  li ght  sou r ce,  SPR int e rfe r ence im agin g  light  path, SPR  sensor  unit, t he mi crofluid ic  sy stem,  CCD im age  acqui sition  system  an d  the  comp uter.  Lig h t so urce  emi tted the l a se r  go th rou gh th e ph ase m o d u lation  and  b eam  expand e r ,  Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
TELKOM NIKA   ISSN:  2302-4 046     Re sea r ch on  Protein The r m a l Conden sation Dete ctio n Based o n  Phase… (Pe n g  HE)  7809 rea c h to th e  pri s m an d  gold film int e rface of S P R sen s or  unit ， after th e refle c ted li ght  intervention,  the imaging l ens ima g ing  the sen s o r  chip su rface in CCD targ e t  surface. CCD   image  acquisition syste m   put the ima g e  data i n to  th e co mpute r , then p r o c e s sing an d an alysis.   SPR imaging  detectio n  of biomole c ula r  intera ct ion ex perim ent devi c e is  sho w n i n  Figure 1.          Figure 1. SPR Imaging  De tection of Biomol ecula r  Intera ction Expe riment Device       2.1.1. The Light Sourc e   The light wa velength fro m  600 nm to 900 nm can inspi r e S P R. We ch o o se the  semi con d u c t o r la se r  as  lig ht  so ur ce,   be cau s e  it ’s  adv antage  of  sm all si ze, l o w consumption  a nd  preh eat fast.  Beside, u s e t he semicond uctor ref r ig e r ator  buil d ing thermo static device  to co n t rol  the workin g tempe r ature o f  semico ndu ctor lase r  ca n  significa ntly redu ce the p o we r noi se a n d   rest rain the temperature drift  caused by  wa velength drift.  Semicon ductor laser output  wavele ngth is 635 nm, couple d  to the single mo de fiber whi c h the core d i ameter is 4 μ m,  connected to the fiber optic collimator by FC optic al fi ber connectors. The  fiber collimator  output  beam dia m et er is ab out 4 mm, divergen ce Angle i s  le ss tha n  1mra d.    2.1.2. SPR Interferen ce Imaging Light Path   Shown  in Fi gure  2, la se r device  1 e m itted  the li ght, pola r izer 2 adj uste d  the light  intensity b e tween th e p  a n d  s light,  ele c tro-o p ti c  cryst a l 3  mod u late d the  pha se,   the mo dulated   light throug h the beam exp ande r len s  group 4, re a c h  to the surfa c e  betwee n  the prism and g o ld   film of SPR sensor  unit through th e p r ism 5, t he refle c ted lig ht inte rvention th ro ugh the  anylyzer  6, the imagi n g  len s  7 i m a g ing the  sen s or chip  su rface  i n  CCD 8  targ et  su rf ace. CCD  im age  acq u isitio n sy stem put the i m age data int o   the comp uter9, then p r o c e ssi ng an d analysi s .       Figure 2. SPR Interferen ce Imaging Lig h t Path      2.1.3. SPR Sensor  Unit    Functio n  of S P R sen s o r  u n it is  co nvert ed the  biom o l ecul ar i n tera ction  re spo n se si gnal   into the cha n ges of ph ase or inten s ity of the li ght. Most importa nt part in SPR se nso r  unit is S P R   sen s in g chip.   SPR chip   i s  mainly comp ose d   of gla s s  su bst r ate,  g o ld  m e mbran e   an d  the   p r o b e   Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
                               ISSN: 23 02-4 046                     TELKOM NI KA  Vol. 12, No. 11, Novem ber 20 14:  78 08 – 781 5   7810 molecule s lin ked  on it, pl ating the thi c k of 2 n m  ch romium film  o n  the  sub s tra t e as  adh esi v e   layer, then  pl ating the thi c k of 5 0  nm  go ld film  on it, t hus  co nstitut ed the  bare g o ld film SPR  chip.  The ba re  gol d film need s l i nk the  pro b e  molecu le s when SPR  chi p  used in  biol ogical dete c ti on.  But the gold film surfa c e i s  hydroph obi c, need ed  ch emical m odifi cation fo r ba re gold film chip   surfa c e, in  order to lin k th e pro be mol e cule s, con s tituted the  sen s ing  chi p . Th e pro be in th is  pape r i s  ly so zyme m o le cu les, ta king  th e lyso zyme  solution  (1m g /mL)  ma ke fo ur  sam p le  po ints  whi c h  diamet er i s  1 mm in   the chip  su rfa c e,  con s titute d a  2×2 a rray .  The p r e para t ion process i s   s h ow n  in  F i gu r e  3 .       Figure 3. SPR Sensor  Chi p s Pre par atio n Process Schematic  Diag ram       The  chi p  a nd  prism ni cely  linke d by  ref r a c tive ind e x oil  (methyl  iodid e , ref r active  i ndex i s   1.740). Mate rial of prism a nd chip s is Z F 5 glass (r efractive index is 1.740 ),  se ction of prism  is   iso s cele s tra pezoid, the base an gle is  60°. Microflui d ic pool (vol u m e is 30 μ L )  installe d on the   chip surfa c e, the  approp ri a t e pressu re  can be seal.     2.1.4. Microfluidic Sy stem  Function of  microfluidi c  filling sy stem i s  le t the test  sampl e   soluti on, buffer and eluent   respe c tively and continu o u s inje cted to  the fluid pool . In the SPR  sen s o r , the reflection p h a s e is  very sen s itive  to the ch ang e of the sen s i ng surfa c e di electri c   refra c tive index, so  don’t allo w a i r  into the liqui d pool in th e  pro c e ss  of experim ent. Then u s in g a u tomatic inj e ction pu mp i nput  sampl e   soluti on, imple m e n ted diffe rent  sol u tion  of  contin uou s i n jecte d  to th e fluid  pool   by  swit chin g the valve, to avoid air into the liquid po ol.    2.2. Experimental Me tho d   Protein th ermal cond en sation i s  a  co mmon  biolo g i cal m o le cula r inte ra ction  pro c e ss,  Before did no t reach the p r otein de natu r ation te mpe r ature, prot ein  thermal co n den sation, form  micelle s, afte r the temp erature  dro p , can al so b e   d i ssoci a ted to  the ori g inal  state, this i s  a  reversibl e  pro c e ss. Lyso zy me is one ki n g  of  common  protein, easil y getting from the biologi cal  prod uct s  ma rket. The p r o b e  in this p a p e r is ly so zy me mole cule s,   t a king t h e ly s o zy me  solut i on  make f our  sa mple poi nts  whi c h di amet er is 1mm i n  the chip  surfa c e, con s tituted a 2 × 2 a r ray. By  detectin g  the intera ction be tween the p r o be lyso zy me molecule s an d the lysozy me mole cule s in  the fluid pool  after heating,  resolved the  dy namics pa rameters of the intera ction.     2.2.1. Recep tor and Ligan d  Reac tion P r oces s   In orde r to m a ke th e probl em sim p le, u s ing th e mo st simple bi o m olecula r  intera ction  model, the re cepto r  and th e ligand bin d i ng equ ation i s :    12 1 2 a d k k A AA A                                                     (1)    A 1  is the rece ptor, A 2  is the ligand, A 1 A 2  is the polymer formation of A 1  and A 2 .  a k  is the  asso ciation  rate co nsta nt, unit is (m ol/L) -1 s -1 ;  d k  is  the diss oc iation  rate cons tant, unit is   s -1 . In  the SPR sen s or, rea c tion s on solid ph a s e surfa c e, [A 1 ] is  the mo larity of A 1 , [A 2 ] and [A 1 A 2 ] is   the numbe r o f  molecule s, shown as Fig u r e 4.   Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
TELKOM NIKA   ISSN:  2302-4 046     Re sea r ch on  Protein The r m a l Conden sation Dete ctio n Based o n  Phase… (Pe n g  HE)  7811     Figure 4.  Solid Phase Su rface Mol e cule s Refle c t Sch e matic Di ag ram      In the pro c e s s of a s soci ation re actio n ， continuously filling it with  a certain tem perature  of A 1 , [A 1 ] is con s tant. At the time of t,  asso ciation  reactio n  rate i s   12 [A ][A ] a k , dissoci a tion   reac tion rate is   12 [A A ] d k , the differe nce valu e is  A 1  A 2  generation rate.     12 1 2 12 [A A ] / [ A ][A ] [ A A ] ta t d t dd t k k                                    (2)     As  A 1 A 2  generated, the correspon ding  re ductio n  in the  numbe r of A 2 .    12 1 2 0 1 2 1 2 [A A ] / [ A ]([A ] [A A ] ) [ A A ] ta t d t dd t k k                         (3)    At the time of t,  the numbe r of A 1 A 2  is:    1 ([ A ] ) t 1 12 2 0 1 [A ] [A A ] [A ] [ 1 ] [A ] ad kk a t ad k e kk                               (4)    At the time of   t  , asso ciation  and di ssoci a tion rea c h ed e quilibri um.     1 ([ A ] ) t 0 ad kk e                                                           (5)    No w, the nu mber of A 1 A 2  is :    1 12 2 0 1 [A ] [A A ] [A ] [A ] a ad k kk                                            (6)    Stop injecting A 1  at  the time of t= t 1 , to inject the buffer  excludi ng A 1 . At this  time, [ A 1 ] = 0 ,  rea c tion towa rds to di ssoci a tion, the rate  of reaction i s :    '' 12 12 d[ A A ] / [ A A ] td t dt k                                              (7)    Then at the time of t, the n u mbe r  of A 1 A 2  as  follows :    1 1 (t ) ' 12 12 [ A A] [ A A] e d kt tt                                              (8)    Disso c iatio n  reactio n  rea c h  to a certain e x tent, change  into the elue nt, A 1  was qui ckly   sep a rate d fro m  the surfa c e  of the solid p hase, [A 1 A 2 ] =  0.     2.2.2. The Calculation Method of Dy na mic  Parameters and the  Equilibrium  Constant  The dyna mic para m eters [12] asce rta i n re a c tion speed of  the biologi cal  m o lecul e s  asso ciation a nd disso c iati on, inclu d ing  the asso ciat ion rate  con s tant  a k  and the  dissoci a tion  rate cons tant   d k . Equilibrium  constant ascertains the  relative number of molecul a r compl e xes  Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
                               ISSN: 23 02-4 046                     TELKOM NI KA  Vol. 12, No. 11, Novem ber 20 14:  78 08 – 781 5   7812 when biomol ecul es  reacti on reac hes to balance, includi ng the asso ci ation equilibrium constant  a K  and the dissociatio n equili brium  con s ta nt d K . The relatio n shi p  betwee n  the 4 con s t ants is:     / / aa d dd a Kk k Kk k                                                          (9)    SPR se nsi n g  method  can  be linea r a nd re al-t ime  detectio n  the  surfa c e  den sity of  biologi cal  mo lecul e s re acti on p r od uct s , so  the  cu rve of the  sig nal  R  chan gi ng  with time  is  obtaine d. Accordin g to the formul a 3 and  formula 7:     1m a x 1 /[ A ] R ( k [ A ] k ) R ta a d t dR dt k                                    (10)    '' / td t dR d t k R                                                        (11)    Dra w in g  with  a tempe r atu r e a s so ciatio n sig nal  cu rve abo ut  / t dR dt  and   R t ， getting  1 k[ A ] k ad  after fitting.  Dra w in g  with  disso c iation   sign al curve   about  ' / t dR d t  and ' t R , gettin g   d k  after fitting. Therefo r e, according to  the  complet e  testing cu rve can be calcul ated the  asso ciation rate  co nsta nt a k , the disso c i a tion rate  consta nt d k , the association equilibrium   con s tant  a K  and the dissoci a tion equilib riu m  con s tant d K .    2.2.3. Time Phase Mod u la tion SPR Imaging De tec t ion Method s   The freq uen cy of visible  light is mu ch hig her th an the re sp o n se frequ ency of the   photoel ectri c  detectio n  d e vice, the  ch ange  of the  optical  pha se  must b e  co nverted to li ght  intensity cha nge s whi c h can   be   mea s ured. Usin g  interfe r omet ry can  co nve r t the  ch ang e of   pha se to the cha nge of  interfero g ra m light in tensity, calcul ating pha se a c cordi ng to  the   measured lig ht intensity. Some comm only pha se   d e tection  algo rithm can b e  use d  for S P R  inclu d ing St oilov algo rithm 、 three  steps fixed l e ngth alg o rith m 、 four  step s fixed len g t h  algorith m 、 fo ur step s  Carre algorith m  a nd Ha riha ran  algorith m .  The compa r i s on of variou s perfo rman ce  of the algorit hm is  sho w n  in Table 1, th e more   “ √ ” said the stronge r the a b ility to suppress the noise  or erro r. Visi ble from the table, the more   pha se shift steps, stro nge r the ability to supp re ss  random n o ise ,  Stoilov is the algo rithm  o f   s t r o ng es t a b i lity.   Phase  erro r  of variou s al gorithm s  sho w n in T able  2, light inten s ity noise is  the main   sou r ce of error. In this 5  kind s of alg o rith m s , Stoilov algorithm  has the st ronge st ability to   rest rain th e li ght inten s ity noise, ca n eli m inate the  li n ear  error of p hase shifter, the e rro r of  re al- time calculati ng pha se si gnal is sm all e r. Ther efore ,  choose Stoilov algorith m  to calculat ing  pha se.       Table 1. The  Comp ari s o n  of Variou s Performa nce of the Algorithm   Error sources   Three s t eps   Four s t ep s   Carre  Hariharan   Stoilo v   Ligh t in tensi t y   noise     √   √   √√   √√   Phase-s h if tin g  noise       √   √   √√   Linear phase -sh i ftin g   error       √√   √   √√   Op tical p o w e r fluctu atio ns       √   √   √   SPR  signal cha nges o v er  ti me       √√   √   √           Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
TELKOM NIKA   ISSN:  2302-4 046     Re sea r ch on  Protein The r m a l Conden sation Dete ctio n Based o n  Phase… (Pe n g  HE)  7813 Table 2.  Pha s e Error of V a riou s Algo rithms(Unit °)  Error sources   Three s t eps   Four s t ep s   Carre  Hariharan   Stoilo v   Ligh t in tensi t y   noise   0.035   0.03  0.03  0.025   0.025   Linear phase -sh i ftin g   error   5  0.1  0  0  0  Op tical p o w e r fl uctu atio ns   0.2  0.3  <0.005   <0.005   <0.005   SPR  signal cha nges o v er  ti me   0.02  0.01  <0.01  <0.01  <0.01      3. The Res u lts and  Discu ssion   Injec t ed ly s o z y me  s o lution with different te mpe r at ure s , the di stribution of  refractive  index chan ge  after the rea c tion  wa s carried o u t 5 mi nutes i s   sho w n in  Figu re  5. Four  ellipti cal  area represented the  four lysozyme probe  ar ea. Background repres ented the  BSA molecul a r   area. Oval  p r obe are a   i s  caused by  ima g ing  system  i m aging  rate i s  in co nformit y  in two  mutu ally  perp endi cul a r dire ction s .  It’s the in he rent e r ror,  will n o t affe ct the te st  and  cal c ulati on  results.Also visible from the figure, sp ecific ity polymeri z ation is exist betwe en the lysozyme   molecule s in  the solutio n  and p r ob e lysozyme  mol e cul e , the hi gher th e tem peratu r e of t h e   solutio n , the stron g e r  the signal, the dee per the  colo r.        Figure 5.  Distribution of Refractive Inde x C hang e after the Re acti on wa s Carri ed out 5 minu tes      We ca n kno w   from  the  formula   4, si gnal  t R  in cre a se s a s  t h e i n cr ea sing  of  t h e  temperature  of the sampl e  unde r test, b u t after t he temperature i n crea se s to a certain valu e, the  signal will be saturated. 5 minut es after injecting the  lysozym e  solution, the relationship  curve  betwe en the respon se  sig nal and lyso zyme solution  temperature i s  sh own in F i gure 6. Visib l e  from the figu re, along  with  the inje ction  of lysozy me  solution temp e r ature in cre a ses, the  sign al  is   stron g e r  and  stron g e r , with  the increa se  of t he temp eratu r e, curv e slop e g r ad ually decre ases,  this co nsi s ten t  with the results of theoret ical an alysi s .      Figure 6. Rel a tionship Curve betwee n  t he Re sp on se  Signal and L y sozyme Sol u tion  T e mp er a t ur e  Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
                               ISSN: 23 02-4 046                     TELKOM NI KA  Vol. 12, No. 11, Novem ber 20 14:  78 08 – 781 5   7814 There a r e  m any influe nce facto r s of  biom ole c ul ar  interaction  experim ent, need   by  repe ated ex perim ents, o b tain the averag e, to  accurately cal c ulate the reactio n  kinet ics  con s tant s. G e t four  re al-ti m e dete c tion   curve s   of  different te mpe r ature ly so zyme solution  b y  four  times of experiment s, shown in Fi gure  7. Visible from the figure,  when t=2min,  start filling it with  lysozyme, la sting for 5  m i nutes, at the  time of  t=7min stop inj e cting lyso zy me sol u tion, then  c ontinue to injec t  PBS buffer.       (a)     (b)       (c )     (d)     Figure 7. Rea l -time Dete cti on Cu rves of  Differ ent Te m peratu r e Ly so zyme Solutio n  Obtain by  Four Tim e s o f  Experiments      Curve fitting  use d  the met hod s de scrib ed abov e, av erag ed the  result s of four times,  obtaine d the  asso ciation  rate co nsta nt is 1.13 ×1 0 3  (mol/L) -1 s -1 , the diss oc iation rate cons tant is   0.84×10 -3  s -1 .  Accordi ng t o  the formul a 9, obtai ned t he associ ation equilibrium constant  is   1.35×10 6  (mol/L) -1  and the  disso c iation e quilibri um co nstant is 8.4 × 10 -7  mol/L.  Comp ared  with method s  of tradition al  biom ol ecula r  interactio n  analysi s , it h a s two   advantag es.  First, witho u t tags, to avoid the infl uen ce on the a c tivity of biological mol e cul e s,  eliminating th e compli cate d and time-co n sumi ng ma rkup  step s; Secon d , real -time detectio n , can  be real -time  and  dynam ically record  the bi omol ecul ar i n tera ction  pro c e s s, getting  m o re   informatio n compa r ed  with  the ELISA a nd other e nd  sign al dete c tion method s.       4. Conclusio n   Thro ugh  anal yzing of the  model of  re ce ptor  an d liga n d  rea c tion, p r oved that the  method  of SPR  sen s i ng p h a s e m e asu r em ent  can d e termi n e  the bi omole c ular i n teractio ns. Put fo rwa r d   the detection  method ba sed on pha se  modulat ion  SPR imaging , analyzed the pre c i s ion  of  pha se  cal c ul ating al gorith m , the results  sho w  th at  Stoilov algo rithm ha s t he h i ghe st a c cura cy.   Build the exp e rime nt device of SPR im aging  dete c tion of bi omol ecul ar i n tera ction, an alyzi n g   some  error  source s of the  appa ratu s, and put forw ard the way to improve d e te ction p r e c isio n.  Biomole c ula r  intera ction  e x perime n t was  ca rrie d  o u t in this  experim ental d e vice, getting  the  Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
TELKOM NIKA   ISSN:  2302-4 046     Re sea r ch on  Protein The r m a l Conden sation Dete ctio n Based o n  Phase… (Pe n g  HE)  7815 lysozyme th ermal  coa gul ation kin e tics paramet e r s. It is proved that this method is  high   sen s itive, lab e less, real-ti m e an d capa ble ofa rra y dete c tio n ,  wh ich c a n me e t  th e r e qu ir eme n t s o f   the resea r ch of lysozyme t herm a l co agu lation.      Ackn o w l e dg ements   This inve stig ation is sup ported  by Mini stry of  sci en ce an d  technol ogy  national  internatio nal  scien ce a n d  technol og y coope ratio n  proje c t (S2013 GR026 4 ) ; Science and  techn o logy  project i n   Heilo ngjian g  p r ovi n ce  ed ucatio n de partm ent  (1 1521 331 );  Natural S c ien c e  Found ation o f  Heilongji a n g , China  (F2 0080 4) a nd  Ministry of scien c e a nd t e ch nolo g y hu imin  proje c ts(2 013 GS2303 01 ).      Referen ces   [1]  Xi ao jun T ,  Xia o y in g W ,  Huali  Z h , etc.  T he in flu ence of  pr otein aggr eg at i on  ca used b y  heat  sh ock   protei n on tran sient m y ocar di al isch emia.  Jo urna l of Chin es e Arterioscl ero s is.  2003; 1 1 (5 ): 391-39 6.  [2]  W e n w ei  L, Din gfen C, H u imi n  R.  Neuro d e g e nerativ e confor mation al d i sea s es an d its mol e cul a r bas is .   Physica l scien ce and pr ogr es s . 2006; 37( 2): 97-1 02.   [3]  Qiming X.  T h e   e x pl orati on of bioc hemic al in gred i ents s u ch  as pr otei n a g g r egati on  an d c ontai ns b o d y   in nerv e  cells.  Stroke and  neu rolo gica l dise a s es . 2003; 2 0 ( 1 ): 5-8.  [4]  Virgin ia C a stil l o , Ricard o  Cr ana-M ontes,  Ra imo n  Sa bat e et al. Pred iction of th e aggr egati o n   prop ensit y  of  prote i ns  fro m  t he  prima r y  s e q uenc e.  Aggr eg atio n  pro perties   of prote o mes,   Biotech nol ogy Journ a l . 20 11; 6(6): 674- 68 5.  [5]  De Sim one  A, Kitchen  C, K w a n  A H , et al .  Intrinsic dis o rder  mo dul ate s  protei n se lf-asse mb ly an d   aggr egati on.  P r ocee din g s of t he N a tio nal  Ac adem y  of Sci e nc es of  the Uni t ed  States   of A m erica. 2 0 1 2 ;   109( 18): 69 51- 695 6.  [6]  Shan pin g  Q, Baoq ian g  Y. A  Java Pro g ram  of  F eature E x t r action A l gor ith m s for Protein  Sequ enc es.   T E LKOMNIKA Indon esi an Jou r nal of Electric al Eng i ne eri ng.  2014; 1 2 (6): 4 322- 432 9.   [7]  Jie Z ,  Dakai  L, Z hen xi n C. T he rese arch of o p tica l fi ber SP R sens or meas urin g li qui d refr active i nde x.   Journ a l of Chi n ese gra i n a nd  oil.   Pie z oelectrics & Acoustooptics . 2005; 2 7 ( 1): 18-20.   [8]  Hui Ch, C haof eng H, Z i yua n  D. SPR bi os ensor a nd its app licati on pr o g ress.  Journ a l  of Chines e   biotec hn olo g y . 200 3; 23(5): 46 -49.  [9]  Lei W ,  Qi Z h ,  Li S. Effects  of smal l mo l e cul a r i nhi bitor s  on t he  bin d i ng  bet w e en  H I V-1 revers e   transcriptas e  a nd D N A as  re veal ed  b y  SP R bi ose n sor.  Sensors  an d  Actuators. B, Che m ic al.  2 0 07;  122( 1): 243- 25 2.  [10]  Xi uli  Li, T i an xin  W e i. T he combin ation  of surf ace p l asmo n  w a ve res ona nce  and c onve n tio nal  detectio n   technology .  Pr ogress i n  che m ical . 20 07; 19( 1): 193-1 99.   [11]  Kretschman n   E, Raether H.  R adi ative d e c a y   of no nrad ia tive surface p l asmons e x c i te d b y  li ght. Z   Naturforsch A. 196 8; 23: 213 5 –21 36.   [12]  Yuan ho ng D,  Z u shu L. Ki net ic Paramet e rs Identificati on  o f  Doubl e Pe nd ulum R o b o t.  TELKO M NI KA   Indon esi an Jou r nal of Electric al Eng i ne eri ng.  2013; 1 1 (3): 1 111- 111 8.       Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.