I n t e r n at ion al   Jou r n a l   of   P u b l ic  Hea l t h   S c ience   ( I JP HS )   Vo l .   7 ,   N o .   3,   S e p t e m b e r   201 8 ,   pp.   207 ~215   I S S N:  2252 - 8806,   DO I 10 . 11591/i j p h s . v 7 i 3. 13694             207       Jou r n al  h o m e page ht tps : // w w w . iaes c or e . c om/jou r nals /i nde x . php/I J P HS   B la c k  C u m in   S e e d  Oi A n t i d i ab e t oge n ic   b y  In c r e asi n g   P an c r e at ic   p 53 E xp r e ssi on       Akr o m 1 Riz m Nurf ad j r in 2 ,   E n d a n Dar m awa n 3 T it iek   Hi d ayat i 4   1 , 2, 3 Ph arm acy   Fa cu l t y ,   U n i v e rs i t as   A h m ad   D a h l a n ,   Y o g y ak art a,   In d o n e s i a   1 A h m ad   D a h l a n   D r u g   I n f o r m a t i an   a n d   c ri s i s   C e n t e (A D D I C C),   I n d o n e s i a   4 Fami l y   M e d i c i n e   an d   P u b l i c   H e al t h   D e p art men t ,   M e d i ci n e   a n d   H e al t h   S c i en ce   Fa c u l t y ,   U n i v e rs i t as   Mu h a mm a d i y ah   Y o g y a k art a,   I n d o n e s i a       Ar t ic l e   I n f o     AB S T RA CT   A r ti c le  h is tor y :   R e c e i ve d   J u n   9 ,   201 8   R e vi s e S e 8 ,   201 8   A c c e pt e S e 15 ,   201 8       Bl ack   c u mi n   s ee d   o i l   (BCSO co n t ai n s   m a n y   t h y mo q u i n o n e   a n d   u n s at u rat e d   fat t y   aci d s   t h at   ac t   as   an t i o x i d a n t s .   T h y mo q u i n o n e   w as   t h o u g h t   t o   i n h i b i t   p an c r e at i c   d a m a g e   an d   p re v en t   h y p e rg l y cemi b y   i n v o l v i n g   p 5 3 .   T h e   s t u d y   ai m ed   t o   d e t e r m i n e   t h BCSO   e ff e c t   o n   M al o n d i a l d eh y d e   (MD A )   l e v el s   an d   p 5 3   e x p re s s i o n   o p an c re at i c   t i s s u e s   i n   al l o x an - i n d u ce d   Sp rag u e   D a w l ey   (SD rat s .   T h i s   s t u d y   u s ed   Pre   a n d   P o s t   T e s t   w i t h   C o n t r o l   G ro u p   D e s i g n   w i t h   4 9   m al e   Sp rag u e   D a w l ey   rat s   ag ed   3 0   d a y s   w ei g h i n g   1 5 0   -   3 0 0   g ram .   Rat s   w e r e   d i v i d ed   i n t o   7   g ro u p s :   G ro u p   I ,   t h e   n o r m a l   co n t ro l   g ro u p   recei v i n g   s t an d ard   feed i n g   an d   d r i n k i n g ;   G ro u p   II,   t h e   n e g at i v e   co n t ro l   g r o u p   r ece i v i n g   al l o x an ;   G ro u p   III   I V ,   t h e   t re at me n t   g ro u p s ,   re cei v i n g   BCSO   w i t h   d o s o 6 . 9   m g / K g B W   (BCSO 6 . 8 an d   6 8   m g / K g B W   (BCS O 6 8   g ro u p );   G ro u p   V ,   t h e   p o s i t i v e   c o n t ro l   1   g r o u p   recei v i n g   s i mv as t at i n   1 0   m g / K g BW ;   G ro u p   V I ,   t h e   p o s i t i v e   c o n t ro l   2   g ro u p   recei v i n g   v i t ami n   1 8   mg / 2 0 0 m g BW ;   G ro u p   V II,   t h e   s o l v en t   co n t ro l   r ece i v i n g   D MSO .   T h e   t r e at men t   g ro u p s   rece i v e d   t w o   d i ff e r e n t   d o s e s   p e d a y   fo 9   d a y s   o ral l y .   Bl o o d   M D A   an d   g l u c o s e   l e v el s   w e r e   d e t e r mi n ed   b y   s p e c t ro p h o t o me t r y   an d   p 5 3   e x p re s s i o n   o p an c r e as   t i s s u e s   w e r e   r e ad   b y   p at h o l o g i s t .   T h e   r e s u l t s   s h o w   t h a t   t h e   BCSO 6 8   g ro u p   h ad   d ec r e as ed   a c t i v i t y   o MD A   an d   g l u co s e   b u t   h i g h e e x p re s s i o n   o p 5 3   i n   p an c r e at i c   t i s s u e s   c o m p ar e d   t o   t h e   BCSO 6 . 8   g ro u p .   D ec r e as e d   Mal o n d i a l d eh y d e   l e v el s   i n   t h BCSO 6 8   g ro u p   w e r e   s i mi l ar  t o   t h o s i n   t h v i t ami n   g r o u p   b u t   l o w e t h an   t h o s e   i n   t h e   s i mv as t at i n   g r o u p   (p < 0 . 0 5 ).   I t   c an   b e   c o n c l u d ed   t h at   t h e   BCSO   ad mi n i s t rat i o n   o 6 8   mg / K g BW   p e d a y   c an   d ec r e as e   b l o o d   Ma l o n d i al d e h y d e   a n d   g l u co s e   l e v el s   an d   i n c r e as e   p 5 3   e x p re s s i o n .     K e y w o r d:   All o x a n   An t i d i a b e t o ge ni c   B l a c s e e c u m i o i l   M a l o n d i a l de hy de   P a n c r e a t i c   P 53  e x pr e s s i o n   Co p yr i g h t   ©   2 0 1 8   In s t i t u t o f   A d va n ced   E n g i n ee r i n g   a n d   S ci e n ce   A l l   r i g h t s   r e s er ved .   C or r e s pon din A u th or :   A kr o m   De pa r t m e n t   o f   P h a r m a c o l o g y   a n C li n i c a l   P h a r m a c y ,   P h a r m a c y   F a c u l t y ,   U ni ve r s i t a s   Ahm a Da hl a n ,   J l .   P r o f .   Dr .   S o e p o m o   S H,   J a n t ur a n ,   Y o gy a ka r t a   55164,   I n do n e s i a .   E m a i l a kr o m @ p h a r m . ua d . a c . i d       1.   I NT RODU C T I ON     D i a b e t e s   m e ll i t us   ( D M )   i s   o n e   o f   t h e   pu bli c   h e a l t h   pr o bl e m s   i I n do n e s i a .   T h e   go ve r nm e n t   ha s   im p l e m e n t e DM   d i s e a s e   m a n a g e m e n t   gui de li ne   b ut   t h e   DM   m o r t a l i t y   r a t e   a n d   n e i nc i de n c e   c o n t i n ue   to  i nc r e a s e .   D i a be t e s   w i t h   hy pe r g ly c e mi c   c o n d i t io n s   c a n   c a u s e   v a r i o us   c o m p li c a t i o ns   s uc h   a s   d i a b e t i c   n e p h r o pa t hy ,   s t r o ke ,   i s c h e m i c   h e a r t ,   r e t i n o pa t hy ,   o r   n e ur o pa t hy   [ 1 ] .   H y pe r g l y c e mi a   o f t e n   o c c ur s   i n   DM   [ 2 ] H y pe r g ly c e mi a   pr o duc e s   e x c e s s i ve   f r e e   r a d i c a l s   r e s u l t i n i o xi da t i v e   s t r e s s   [ 3 ] .   F r e e   r a d i c a l s   c a us e   c e l l   da m a ge   t h r o ugh   l i p i m e m b r a ne   pe r o xi da t i o n   [ 4 ] .   I n c r e a s e f r e e   r a d i c a l s   w i ll   o f t e n   be   f o l l o we by   in c r e a s e d   l e v e l s   o f   M a l o n d i a l de hy de   ( M D A )   a n i n f l a mm a t i o n .   C li n i c a ll y ,   M D A   w i t h   i n f l a mm a t or y   m e d iato r s   i s   a   bi o m a r ke r   o f   o xi da t i v e   s t r e s s   i t h e   b o d y   [ 5 ] .   I n c r e a s e M D A   l e v e l s   h a v e   b e e n   s h o wn   t o   b e   a s s o c i a t e wi t Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
                                I S S N :   2252 - 8806   I J P HS    V o l .   7 ,   N o.   3 S e p t e m b e r   2018   207    21 5   208   po s t - s t r o ke   e v e n t   [ 6 ] ,   i n c i de n c e   o f   P o st - T r a um a t i c   S tr e s s   D i s o r de r   [ 7 ] ,   a n t h e   i n c i d e n c e   o f   pr e e c l a m ps i a ,   wh e r e   t he   c o n d i t i o n   i s   c l o s e ly   r e l a t e t o   o xi da t i v e   s t r e s s   c h a r a c t e r i z e by   h i g h   r e a c t i v e   o xy g e n   s up e r f a m il ( R O S )   a n i nf l a mm a t o r y   r e a c t i o n   [ 8 ] .   All o x a n   i s   a   d i a b e t o ge ni c   c o m po un t h a t   de s t r o y s   pa n c r e a t i c   i s l e t   c e l l s   s o   t h a t   i ns u l i pr o duc t i o n   i s   re duc e a n hy pe r g ly c e mi a   o c c ur s   [ 9 ] .   I n t r a pe r i t on e a l   a ll o x a n   i nduc t i o h a s   b e e n   s h o wn   t o   c a us e   da m a ge   t pa n c r e a t i c   i s l e t   c e l l s   a n t he   i nc i d e n c e   o f   hy pe r g l y c e mi a   pr e c e de by   e l e v a t e l e v e l s   o f   R OS  a n M D A   a n d   f o l l o w e by   a n   i n f l a m m a t o r y   r e a c t i o n   [ 10,   11 ] .   R OS  a n d   NO S   due   t o   e x po s ur e   to   a l l o x a n   s p ur   l i p i m e m br a n e   pe r o xi da t i o n   a n o xi da t i o n   r e a c t i o ns   i n   pr o t e i n s   a n DN A   [ 4,   11,   12 ] .   P a n c r e a t i c   i s l e t   c e ll   de s t r uc t i o n   due   t o   e x po s ur e   to   a l l o x a n   i s   c h a r a c t e r i z e by   ge ne t i c   da m a ge   ( DN A )   a n e l e va t e M D A   l e v e l s   [ 13 - 15 ]   P 53  ge ne   p l a y s   a n   im po r t a n t   r o l e   i m o du l a t i n t h e   e f f e c t   o f   e l e v a t e i n t r a c e l l u l a r   R OS  o r   NO S   l e v e l s ,   r e pa i r i n g e n e t i c   da m a ge   a n r e gu l a t i n th e   b a l a nc e   o f   i n f l a mm a t or y   r e s po ns e s   [ 12,   16,   17 ] .   P 53   pr ot e i n   p l a y s   a   r o l e   i s t i m u l a t i n a po pto s i s   i c e l l s   u n d e r go i n ge n e t i c   s t r e s s   due   to   o xi da t i v e   s t r e s s   a n d   i nh i b i t i n t he   i nf l a mm a t o r y   r e a c t i o n   t h r o ugh   s uppr e s s i o n   o f   pr o - i nf l a mm a t o r y   t r a n s c r i pt i o n   f a c to r   NF - ka ppa B .   Un de r   n o r m a l   c o n d i t i o n s ,   t h e   p53  ge ne   i s   i na c t i v e .   P 53  ge ne   i s   a c t i v a t e by   t h e   pr e s e n c e   o f   o xi da t i v e   s t r e s s   o r   ge n e t i c   da m a g e .   [ 18,   19 ]   S e v e r a l   s t ud i e s   h a v e   pr o v e n   t h a t   B l a c c u mi n   ( N i ge ll a   s a t i v a   L . )   c a n   l o we r   bl o o gl uc o s e   l e v e l s   [ 20 ] .   T hy m o qu i n o ne   i s   i de n t i f i e a s   a   m a j o r   c o m po n e n t   ( o v e r   50% )   o f   bl a c c u mi s e e e s s e n t i a l   o i l ,   o r   B C S [ 21 ] .   T hy m o qu i n o n e   pr o v e t o   h a v e   a n   e f f e c t   a s   a n   a n t i o xi d a n t   a n i mm u n o m o du l a t o r   [ 22 - 24 ] .   I t   pe r f o r m s   i t s   a c t i vi t y   a s   a a n t i o xi da n t   by   m e a n s   o f   a   hy dr o ge n   do n o r   to   f r e e   r a d i c a l s   [ 23 ] .   H i g h   lev e l s   o f   t i m o xy ge n   i B C S a r e   e x pe c t e to   a c t   a s   a n t i o xi da n t s   a n c a n   pr e v e n t   c e l l   da m a ge   i nduc e by  a l l o x a n .   B a s e o pr e vi o u s   s t ud i e s ,   i t   i s   e vi de n t   t h a t   B C S m a y   i nc r e a s e   p53   e x pr e s s i o n   i t h e   li ve r   t i s s ue   o f   a l l o x a n - i nduc e r a t s   [ 25 ] .   W e   hy po t h e s i z e   t ha t   t hy mo qui n o n e   c a n   pr e v e n t   pa n c r e a t i c   c e ll   da m a ge ,   pr e v e n t   hy pe r g ly c e mi a ,   a n i nc r e a s e   p53  e x pr e s s i o n .   T hi s   s t udy   a im s   t o   de t e r m i ne   t h e   e f f e c t   o f   B C S o n   M a l o n d i a l de hy de   l e ve l s   i n   a ll o x a n - i nduc e S pr a gue   da w l e y   r a t s .       2.   RE S E AR CH  M E T HO D     2 . 1.     To ol s   an d   M a t e r ial s   T hi s   r e s e a r c h   i s   a n   e x pe r im e n t a l   r e s e a r c h   w i t h   P r e t e s t   a n P o s tt e s t   C o n tr o l   D e s i g n .   T hi s   s t ud y   us e s   s pe c t r o ph oto m e t e r   ( UV - 1201V  S hi m a dz u) ,   a n a ly t i c a l   b a l a n c e   ( A d v e n t ur e r )   f o r   we i g hi ng  s a m p les ,   s pu i t   i n j e c t i o n   ( T e r u m o ) ,   o r a l   m o us e   s o n de ,   c a p i ll a r y   p i pe ,   m e a s ur i ng  c up  ( p y r e x ) ,   m o r t a r   s t a m pe r ,   E ppe n do r f ,   m o us e   c a ge   ( p y r e x ) ,   f u nn e l   ( p y r e x ) ,   f l a c o n ,   b e a k e r   ( p y r e x ) ,   a n t e s t   t ub e   ( p y r e x ) .   T h e   i ngr e d i e n t s   us e a r e   bl a c k   c u mi s e e ds   ( P T   M e ga   Agu n S e t i a ) ,   vi t a mi C   f r o m   I P I   t a bl e t s ,   s im va s t a t i 10  m g e n e r i c   t a bl e t s   ( S OH O) ,   DM S ( di m e t hyl   s u l f o xi d e ) ,   a l l o x a n   m o n o hy dr a t e   ( S i g m a ) ,   a q ua de s t ,   h e pa r i n   ( a n t i c o a gu l a n t ) ,   T B A   r e a ge n t s ,   p53  m o n o c l o n a l   a n t i b o d i e s ,   s e c o n da r y   a n t i b o d y   a n im m u n o hi s t o c h e m i c a l   t i s s ue   d y e s   i . e .   DA B .   T h e   e x pe r i m e n t a l   a nim a l s   us e a r e   49  S pr a gue   Da w l e y   m a l e   r a t s   a ge 30  da y s   we i g hi ng   f r o m   150  t 300  gr a m s   o b t a i ne f r o m   t h e   Na t i o n a l   F o o a n Dr ug  T e s t   C e n t e r   o f   Anim a l   L a b o r a to r y   o f   E x p e r i m e n t s ,   B P OM   R I   J a ka r t a .   T h e   a nim a l s   a r e   d i vi d e i n t o   gr o ups . . T h e   s t udy   pr o to c o l   wa s   r e vi e we a n r e c e i ve a   l e t t e r   o f   e t hi c a l   c l e a r a nc e   f r o m   t h e   r e s e a r c h   e t hi c s   c o m mi t t e e   o f   L P P T   UG M   n o   222 /K E C - L P P T /I I I / 2015.     2 . 2      Re s e ar c h   p r oc e d u r e   2. 2. 1.   T r e at m e n t   an d   I n d u c t ion   of   A l l o x an   A   t ot a l   o f   49  S r a t s   a ge we e ks   we r e   r a n do m ly   d i vi d e i n t s e v e n   gr o ups   a n qua r a n t i n e f o r   da y s   pr i o r   to   t h e   tr e a t m e n t .   T h e   gr o ups   we r e Gr o up  I ,   t h e   n o r m a l   c o n t r o l   gr o up  r e c e i vi ng  s t a n da r d   f e e d i ng  a n dr i n k i ng ;   Gr o up  I I ,   t h e   n e ga t i v e   c o n t r o l   gr o u r e c e i vi ng  a l l o xa n;   Gr o up  I I I   &   I V,   t h e   tr e a t m e nt   g r o ups ,   r e c e i vi ng  B C S w i t h   a   do s e   o f   6. m g/ K gB W   ( B C S O6. 8)   a n 68  m g/ K gB W   ( B C S O68  gr o up) ;   Gr oup  V,   t h e   po s i t i v e   c o n t r o l   gr o up  r e c e i vi ng  s i m va s t a t i n   10  m g/ K gB W ;   Gr o up  VI ,   t h e   po s i t i v e   c o n t r o l   gr o u p   r e c e i vi ng  vi t a m i C   18  m g/ 200 m gB W ;   Gr o up  VI I ,   t h e   s o l v e n t   c o n tr o l   r e c e i v i ng  DM S O.   Af t e r   t h e   a da pt a t i o pe r i o d,   gr o ups   I I - V I I   b e ga n   t r e c e i ve   t r e a t m e nt   pe r f o r m e o r a l ly   e v e r y   d a y   be f o r e   m e a l s   f o r   da y s .   On   d a y   7,   t h e   mi c e   we r e   i nduc e w i t a ll o x a n   ( 125  m g/ kgB W )   i n t r a pe r i t o n e a ll y .   O n   da y   8,   t h e i r   bl o o g l uc o s e   l e ve l s   we r e   t e s t e d.   On   da y   9,   t h e i r   bl o o M D A   l e v e l s   w e r e   e x a mi ne d.     2. 2. 2.   Chec k in B l ood   Gl u c os e   an d   M DA   L e ve l s   a.   E x a m in at ion   of   B l ood   S u gar   L e ve ls   On   t h e   7t h   ( be f o r e     a ll o x a n   i nduc t i o n ) ,   8t h     a n   9 t h   da y ,   t h e   t e s t   a nim a l s   we r e   t a ke bl o o s a m p l e s   f o r   t h e   e x a mi na t i o n   o f   g l uc o s e   l e v e l s .   B l o o s a m p l e s   t a ke n   f r o m   mi c e s   o r bi t a l   s i nus   we r e   c o l lec t e i n t E ppe n do r f   c o n t a i ni ng  a n t i c o a gu l a n t   ( h e pa r i n )   a n d   l e f t   a t   r oo m   t e m pe r a t ur e   f o r   a t   l e a s t   30  m i nut e s ,   f o l l o we d   by   l o w - s pe e c e n t r i f uga t i o n   ( 4000  r p m )   f o r   15  m i nut e s .   B l o o wi ll   b e   s e pa r a t e i n t o   t w o   pa r t s r e a t   t h e   Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
I J P HS    I S S N:  2252 - 8806       B lack   C umin  Se e Oil   A nti diabetoge nic  by   I nc r e as ing  the  P anc r e ati c   p 53  E x pr e s s ion  ( A k r om )   209   b o tt o m   a n li g h t   y e ll o p l a s m a   a t   t h e   t o p .   Af t e r   c e n t r i f ug a t i o n ,   p l a s m a   s a m p l e s   we r e   s e pa r a t e by  us i n a   P a s t e ur   pi pe t t e   a n t h e n   t h e   g l uc o s e   l e ve l s   we r e   e xa m i ne us i ng  s pe c t r o ph oto m e t r i c   m e t h o d.     b.   E x a m in at ion   of   M DA   L e ve l s     On   t h e   9t h   da y ,   bl o o wa s   t a ke f o r   M D A   e xa m in a t i o n .   B l o o s a m p l e s   t a ke n   f r o m   m i c e s   o r bi t a l   s i n u s   we r e   c o l l e c t e i n t o   E ppe n do r f   c o n t a i ni ng  a n t i c o a gu l a n t   ( h e pa r i n )   a n l e f t   a t   r oo m   t e m pe r a t ur e   f o r   a l e a s t   30  m i nut e s ,   f o l l o w e by   l o w - s pe e c e n t r i f ug a t i o n   ( 4000  r p m )   f o r   15  mi nut e s .   B l o o wi ll   b e   s e pa r a t e d   i n t o   t w o   pa r t s r e a t   t h e   b o tt o m   a n d   l i g h t   y e ll o p l a s m a   a t   t h e   t o p .   Af t e r   c e n t r i f uga t i o n ,   p l a s m a   s a m p l e s   we r e   s e pa r a t e by   us i ng  a   P a s t e ur   p i pe t t e   a n t h e n   t h e   M D A   l e ve l s   w e r e   e x a mi ne T h e   l e v e l   wa s   m e a s ur e us i n g   0. 05  ml   o f   s a m p l e   a dd e w i t h   0. 25  ml   T B A   40  M m ,   0. 75  ml   o f   H3PO4  1% ,   a n 0. 45  ml   o f   H 2O.   T h e   s a m p l e   a n r e a ge n t s   we r e   m i xe e ve nl y   w i t h   t h e   d i v o r t e x ,   a n t h e   r e s u l t i n mi x t ur e   wa s   h e a t e i a   wa t e r   b a t h   f o r   60  mi nut e s   a t   100  °   C .   Ne x t ,   t h e   s a m p l e   w a s   r e m o v e f r o m   t h e   wa t e r   b a t h   a n put   i n t o   a n   i c e   b a t h   t c oo l   u n t i l   t h e   t e m p e r a t ur e   r e a c h e 30o C .   T h e   c o l s a m p l e   wa s   a pp li e t o   c o l u m C 18.   B e f o r e   t h e   a b s o r b a n c e   wa s   r e a d,   t h e   C 18  c o l u m wa s   e l u c i d a t e w i t h   ml   m e t h a n o l   a n t h e n   d i s c a r de d,   e l ut e w i t h   m o f   H2O   t h e d i s c a r de d,   a n d   f i na ll y   pa r s e d   i n t o   c o l u m C 18  a n t h e d i s c a r de d.   T h e   M D c o m po n e n t s   w o ul be   b o un t o   c o l u m C 18.   T o   r e m o v e   n o n - M D c o m po n e n t s ,   t h e   c o l u m wa s   e l ut e a ga i w i t h   4   ml   o f   H2O   a n d   t h e n   d i s c a r de d.   S u b s e que n t l y ,   t h e   c o l u m wa s   e l ut e w i t h   5   m l   o f   m e t h a n o l   t o   i de n t i f y   t h e   M D c o m po n e n t s   b e f o r e   b e i ng   put   i n t o   t h e   t e s t   t ub e .   T he   c o l l e c t e s a m p l e s   we r e   i ns e r t e i n t o   a   c m   c u v e tt e   to   b e   r e a up t a ke   wi t h   a   s pe c t r o ph oto m e t e r   a t   a   wa v e l e ngt h   o f   532  nm .     2. 2. 3.   E x am in at ion   of   p 53  P an c r e at ic  E x p r e s s io n   a.   S a m p li ng  a n P a n c r e a t i c   T i s s ue   F i xa t i o n   P a n c r e a t i c   s a m p li ng  wa s   pe r f o r m e a f t e r   t h e   m i c e   we r e   t r e a t e f o r   14   da y s .   C e r vi c a l i s   d i s l o c a s i o   wa s   pe r f o r m e d   a n d   t h e n   t h e   mi c e s   a b do m e n   w a s   d i s s e c t e a n d   t h e   pa n c r e a t i c   o r ga ns   we r e   t a ke w i t h   gr e a t   c a r e   to   a v o i t i s s ue   da m a g e .   T h e   pa n c r e a t i c   o r ga n s   we r e   t h e n   r i ns e w i t h   0. 9%   o f   p hy s i o l o g i c a l   Na C a n t h e   li ve r   wa s   s o a ke i n   a   P B S - A z i de   s o l ut i o n   pH  7. 4.   b.   T i s s u e   B l o c k i n g   P i e c e s   o f   pa n c r e a s   t h a t   we r e   p l a c e i po t s   c o n t a i ni ng  f o r m a li n.   T he   t i s s u e   we r e   c ut   us i ng   mi c r o to m e s .   T h e   t i s s ue   wa s   t h e n   f i xe w i t h   i nc u ba to r s   a t   370C - 400C   f o r   18 - 24  h o ur s .   A f t e r   t h e   f i xa t i o n   wa s   c o m p l e t e ,   t h e   t i s s ue   wa s   f e i n t o   t h e   a qua de s t   s o l ut i o n   to   r e m o v e   t h e   f i xa t i o n   s o l ut i o n .   T h e   n e x t   s t e p   wa s   t h e   de hy dr a t i o n   pr o c e s s .   I n   t h e   de hy dr a t i o n   pr o c e s s ,   t h e   t i s s ue   p i e c e s   we r e   i ns e r t e i n t o   t h e   a l c o h o l i c   c o n c e n t r a t i o n   o f   t h e   s t r a t i f i e c o nc e n t r a t i o n .   T h e   t i s s ue   wa s   t h e n   f e i n t o   a   pur e   xy l o l   a l c o h o l   s o l u t i o n   f o r   2x h o ur s .   T h e   n e x t   pr o c e s s   wa s   im pr e g n a t i o n .   T h e   t i s s ue   wa s   i ns e r t e i n   li qu i pa r a f f i f o r   2x ho ur s .   T h e   f i na l   s t e wa s   e m b e dd i ng.   I n   t hi s   pr o c e s s ,   t h e   t i s s ue   wa s   gr o wn   i n   s o l i pa r a f f i w i t h   a   m e l t i ng   po i n t   o f   560C - 580C   un t i l   t h e   pa r a f f i n   s o l i d i f i e d.   c.   P r e pa r a t i o n   o f   T i s s u e   S a m p l e s   f o r   I m m u n o hi s t o c he m i s t r y   T h e   im m u n o hi s t o c h e m i c a l   pr e pa r a t i o n   wa s   do n e   a t   A na to m y   P a t h o l o g y   L a b o r a to r y ,   F a c u l t y   o f   M e d i c i ne ,   Ga d j a h   M a da   U ni ve r s i t y ,   Yo g y a ka r t a .   B e f o r e   m i c r o to m e s   c utt i n g,   t h e   bl o c k   wa s   c o o l e d   by   i c e - c ub e   o r   i n s e r t e i n   a   f r e e z e r   f o r   ±   15  m i nut e s .   T h e   bl o c wa s   c li ppe to   a   m i c r o to m e   a n t h e n   c ut   wi t h   a   mi c r o to m i c   bl a de   w i t h   a   s l o pe   o f   ±   300  t o   a   pa r a f f i bl o c k   o f   ±   2 - mi c r o n s   t hi c k.   A   r i bb o n - c ut   pi e c e   i ns e r t e i a   w a t e r   b a t h   pr e vi o us ly   f il l e w i t h   wa r m   w a t e r   ±   500C ,   t h e n   t a ke n   w i t a   g l a s s   o bj e c t   a n g i ve n u m be r   w i t h   a   g l a s s   pe n c il   i a c c o r da n c e   w i t h   t he   r e g i s t r a t i o n   n u m be r   o f   t h e   bl o c k,   l e f t   f o r   mi n ut e s   a n d   t h e n   i nc u b a t e d.   D i s po s a bl e   k ni ve s   w e r e   us e d   a n d   t h e   k ni ve s   a t   t h e   t i m e   o f   t h e   wa t e r   b a t h   w e r e   g iv e 50%   a l c o h o l   t l o we r   t h e   s ur f a c e   t e n s i o n   t h a t   h e l p s   s t r e tch   t h e   r i bb o n .   d.   I m m u n o hi s t o c h e mi c a l   E x a mi na t i o n   o f   p53  E x pr e s s i o n   I m m u n o hi s t o c h e mi s t r y   s t a i ni ng  w a s   do n e   a t   P a r a s i t o l o g y   L a b o r a to r y ,   F a c u l t y   o f   M e d i c i ne ,   UG M .   T h e   pa r a f f i b l o c ks   we r e   c a r r i e o ut   w i t h   xyl o l   f o r   2 x mi nut e s .   T h e   pr e pa r a t i o ns   we r e   r e hy dr a t e us i ng   100%   e t h a n o l ,   80%   e t h a n o l ,   a n 70%   e t ha n o l   e a c h   f o r   2 x 5   m i n.   C o l m e t h a n o l   wa s   a dde d   a n t h e n   t h r o w a n s o a ke i n   pe r o xi da s e   bl o c k i ng  s o l ut i o n   ( P B S )   a t   r oo m   t e m p e r a t ur e   f o r   2x m i nut e s   a n s u b s e que n t l wa s h e w i t h   a qua d e s t   f o r   2x m i nut e s .   t h e   pr e pa r a t i o n   i s   t h e n   dr o ppe w i t h   hy dr o ge n   pe r o xi d e   f o r   10  mi nut e s   a n wa s he w i t h   P B S   f o r   2x m i nut e s .   T h e   l i ve r   pr e pa r a t i o n   wa s   i n c u b a t e i n   pr e d i l ut e bl o c k i ng   s e r u m   a t   25 °   C   f o r   10  m i n .   T h e n   t h e   pr e pa r a t i o n   wa s   s o a ke i n   pr i m a r y   a n t i b o d y   a t   25°   C   f o r   h our .   I t   wa s   t h e n   w a s h e w i t P B S   f o r   2x mi nut e s ,   a n i nc u b a t e w i t c o nj uga t i o n   o f   h o r s e r a d i s h   p e r o xi da s e   a t   25 °   C   f o r   20  mi nut e s .   T h e n ,   t h e   pr e pa r a t i o n   wa s   wa s h e d   w i t P B S   f o r   2x 2   mi nut e s   a n t h e n   i t   wa s   s p il l e d   by   HR P   ( T r e A vi d i n )   f o r   10  m i nut e s .   T h e   pr e pa r a t i o n   wa s   wa s h e a ga i w i t h   P B S   f o r   3x m i a n t h e n   i n c ub a t e w i t h   D A B   c h r o m o ge n   ( D i a mi n o b e n z i n i d i ne )   a t   2 5 °   C   f o r   m i n .   T h e   pr e pa r a t i o n   wa s   i nc u b a t e a ga i n   w i t h   M a y e r   He m a t o xy l i f o r   m i nut e s ,   a f t e r   whi c h   it   wa s   wa s h e w i t h   r u nni ng  wa t e r   un t i l   t h e   c o l o r   b e c a m e   Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
                                I S S N :   2252 - 8806   I J P HS    V o l .   7 ,   N o.   3 S e p t e m b e r   2018   207    21 5   210   pur p l e   bl u i s h .   T h e   e t h a n o l - d i ppe pr e pa r a t i o n   w a s   t h e d i ppe i xyl o l   a n c o v e r e w i t a   g l a s s   c o v e r .   T h e   p53  e x pr e s s i o n   ( b r o wn   c o l o r )   wa s   o b s e r v e i n   c e l ls   us i n a   l i g h t   m i c r o s c o pe   wi t h   40  t i m e s   m a g nif i c a t i o n .     e.   P h o to g r a phy   ( M i c r o ph o to g r a phy )   T h e   po r t i o n   o f   t h e   pr e pa r a t i o n   t o   b e   ph o to g r a ph e d   wa s   i d e n t i f i e us i ng  a   li g h t   m i c r o s c o pe   a n t h e n   m a r ke d.   T h e   m a r ke pr e pa r a t i o n s   we r e   r e a d y   t b e   ph o to g r a ph e d.   T h e   pr e pa r a t i o ns   we r e   o b s e r v e us i n a o c ul a r   l e n s   m i c r o s c o pe ,   a c c or di n t m a g ni f i c a t i o n   a n d i a p h r a g m .   Onc e   c h e c ke us i ng  a n   o c u l a r   l e ns ,   t h e   c a m e r a   w a s   a d j u s t e to   ga i n   f o c us .   W h e n   t he   c o n d i t i o n   wa s   o pt i m u m ,   t h e   s t o c wa s   r e a dy   t o   b e   ph o to gr a ph e d.   A t   t h e   s a m e   t i m e ,   r e c o r di n o f   t y p e s   o f   pr e pa r a t i o ns ,   m a g ni f i c a t i o n ,   a n t i ge ns ,   a n d   o th e r   da t a   a b o ut   f i lm s ,   m i c r o s c o pe s ,   c a m e r a s   we r e   a l s o   pe r f o r m e d.   E a c h   pr e pa r a t i o n   wa s   p h o to g r a ph e t i m e s   pe r   a n g l e .   F o r   m i c r o gr a ph   s c a l e ,   a   mi c r o m e t e r   s c a l e   s h o ot   wa s   c a r r i e o ut .   T h e   e x pr e s s i o n   o f   p53  wa s   s h o wn   in  pur p l e   b r o wn .   T h e   c o l o r   pur pl e   i nd i c a t e s   t h e   a b s e n c e   o f   p53  e x pr e s s i o n   o n   t h e   c e ll   s o   i t   i s   u n de t e c t a bl e .   P e r c e n t a ge   o f   e x pr e s s i o n   w a s   c a l c u l a t e by   t h e   nu m b e r   o f   p53  e x pr e s s i o n   c e ll s   d i v i de by   t h e   tot a l   n u m be r   o f   o b s e r ve c e l l s   m u l t i p li e by   100% .     2 . 3   Anal ys is   of   D at a   B l o o gl uc o s e   a n M D A   da t a   we r e   pr o c e s s e w i t a   f r e e   v e r s i o n   o f   S P S S   16.   K o l m o go r o v   S m i r n o a n L e v e n e   t e s t s   we r e   us e t de t e r m i ne   t h e   d a t a   d i s t r i b ut i o n   a n h o m o ge n e i t y .   I f   n o r m a ll y   d i s t r i b u t e wi t h   h o m o ge n e o us   v a r i a n t ,   t h e   da t a   a r e   t h e n   t e s t e w i t h   pa r a m e t r i c   t e s t   us i n a na l y s i s   o f   o n e - wa y   v a r i a n c e   ( A NN OV A )   t m e a s ur e   d i f f e r e n c e s   a m o n gr o ups .   I f   t h e   da t a   i s   n o t   n o r m a l ly   d i s t r i b ut e a n n ot  h o m o ge n e o us ,   t h e   n o n - pa r a m e t r i c   t e s t   i s   do n e   u s i ng  K r us ka l   W a ll i s   a n M a nn - W hi t n e y   w i t h   95%   c onf i de n c e   l e v e l .   I f   t h e   r e s u l t s   a r e   d i f f e r e n t ,   L S t e s t   wi t h   95%   c o nf i de n c e   l e v e l   i s   us e d.   M e a n   g l uc o s e ,   M D A ,   a n p53   e x pr e s s i o n s   a r e   t e s t e o n   a v e r a ge   a m o n g   gr o ups   w i t h   95%   c o nf i de nc e   l e v e l .   T he   de s c r i pt i o n   o f   im m u n o hi s t o c h e m i c a l   r e s u l t s   o f   p53  e x pr e s s i o f r o m   e a c h   t r e a t m e n t   gr o up  wa s   c a l c u l a t e ba s e o pe r c e n t a ge s   o f   c e ll s   e x pr e s s i ng  p53,   a n t h e n   a n a ly z e us i ng  m e a n   d i f f e r e n c e   t e s t .       3.   RE S UL T S   A ND  DI S CU S S I ON   3. 1.     T h e   B l ood   Gl u c os e   L e ve l   All o x a n   i nduc t i o c a us e s   d e s t r uc t i o n   o f   pa n c r e a t i c   be t a   c e l l s ,   d e c r e a s e s   i ns u l i pr o duc t i o n ,   a nd  i nc r e a s e s   bl o o g l uc o s e   l e v e l s .   B l o o g l uc o s e   l e ve l s   o f   t e s t   a nim a l s   b e f o r e   a n a f t e r   a ll o x a i n du c t i o n   a n d   B C S t r e a t m e n t   a r e   pr e s e n t e i T a bl e   1 .   T a bl e   1   b l o o g l uc o s e   l e v e l s   b e f o r e   a n a f t e r   a ll o x a i nd uc t i o n   i n   S r a t s   r e c e i vi n g   B C S f o r   da y s .   T h e   a d mi n i s t r a t i o n   o f   B C S wa s   e qu i va l e n t   to   t h e   do s e   o f   t hy m o qu i n o n e   a t   6. a n 68  m kgB W   s t a r t i ng  f r o m   d a y s   b e f o r e   a ll o x a n   i nduc t i o n   wa s   pe r f o r m e d.   All o x a n   i ndu c t i o wa s   pe r f o r m e d   i n t r a pe r i t o n e a l ly   w i t a   do s e   o f   125   m g/ kgB W   o t h e   7t da y .   B l o o g l uc o s e   m e a s ur e m e n t s   we r e   do n e   o n   t he   7t h   da y   b e f o r e   a ll o x a n   i nduc t i o n   a n o n   t h e   1 s t   a n 3r d a y s   a f t e r   t h e   i n du c t i o n .       T a bl e   1.   B l o o d   Gl uc o s e   L e v e l s   E x p e r im e n ta G r o up   N   B l oo G lu c o s e  l e v e be f or e   in duc ti o n   ( M e a n±S D )  ( mg/ dl )   B l oo G lu c o s e  l e v e in  1s da y  a f t e r  a ll ox a n i ndu c ti o n   ( M e a n±S D )  ( mg/ dl )   B l oo G lu c o s e  l e v e in  3s da y   a f t e r  a ll ox a n i ndu c ti o n   ( M e a n±S D )  ( mg/ dl )   N o r ma l   6   77.88±3.38   77.83±2.92   79.36±2.49   A ll ox a   6   72.43±3.31   171.13±2.92   310.42±35.52   A ll ox a n+ B C S O 6.8 ml /k g B W   6   76.50±2.43   175.00±2.19   174.30±2.06   A ll ox a n+ B C S O 68 ml /k g B W   6   76.33±2.16   174.23±2.37   153.85±2.20   A ll ox a n+ S im v a s ta ti n   6   78.33±2.5   176.59±2.57   100.84±32.82   A ll ox a n+ V it a mi n   C   6   81.33±3.56   178.50±3.27   80.13±18.61   D M S O  S o l ve nt     6   81.33±3.57   81.33±3.56   81.33±3.55       T h e   r e s u l t s   s h o t h a t   b e f o r e   t h e   a l l o x a n   i nduc t i o n,   t h e   t e s a ni m a l s   h a n o r m a l   bl o o g l uc o s e   ( B G)   l e v e l s   a n n o   i n t e r gr o up  di f f e r e nc e s .   All o x a n   i ndu c t i o n   h a s   b e e n   s h o wn  t o   i n c r e a s e   bl o o g l uc o s e   l e v e l s .   O t h e   f i r s t   a n 3r da y   a f t e r   a l l o xa n   i n duc t i o n ,   bl o o g l uc o s e   l e ve l s   i n   e x pe r im e n t a l   gr o ups   we r e   hi g h e r   t h a n   t h e   n o r m a l   o r   s o l ve n t   gr o ups   ( p < 0. 05 ) .   B C S a dm i n is t r a t i o n   wa s   a bl e   t o   l o we r   t h e   B l e v e l s ,   a s   s h o wn   by   t h e   l o we r   B l e v e l s   o f   t h e   t r e a t m e n t   gr o ups   c o m pa r e to   t h e   a l l o x a gr o up  ( p < 0. 05) ,   e x c e pt   f o r   t h e   B C S O6. gr o up  ( p> 0. 05) .   Da t a   f r o m   t hi s   s t ud y   s h o t h a t   B C S O68,   s i m va s t a t i n ,   a n vi t a mi C   i nh i b i t   e l e va t e B G   l e v e l s   a f t e r   a l l o xa n   i n duc t i o n .   B C S O,   s i m va s t a t i n   a n vi t a mi C   t h r o ugh   t h e   m e c h a ni s m   o f   a n t i o xi da n t s   Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
I J P HS    I S S N:  2252 - 8806       B lack   C umin  Se e Oil   A nti diabetoge nic  by   I nc r e as ing  the  P anc r e ati c   p 53  E x pr e s s ion  ( A k r om )   211   r e duc e   t h e   pa nc r e a t i c   da m a ge   c a us e by   f r e e   r a d i c a l s   pr o duc e by   a ll o x a n ,   a n t h u s   u ni n t e r r upt e i n s u li n   pr o duc t i o n   a n c o n t r o l l e bl o o s uga r   l e v e l s   [ 10,   20 ].     3. 2.     B l ood   M al on d ial d e h yd e   L e ve l   All o x a n   i s   a   s o ur c e   o f   f r e e   r a d i c a l s .   T h e   a l l o xa n   m e c h a ni s m   d a m a ge s   pa n c r e a t i c   b e t a   c e l l s   t h r o ugh  o xi da t i v e   s t r e s s .   T h e   a ll o x a n   t h a t   e n t e r s   t h e   b o d y   r e l e a s e s   t h e   r e a c t i v e   r a d i c a l   c o m po un c a u s i ng  o xi da t i v e   s t r e s s   o f   li p i pe r o xi da t i o n   i t h e   p l a s m a   m e m br a n e .   F i gur e   s h o ws   t h a t   a l l o x a i nduc t i o n   i nc r e a s e s   M D l e v e l s ,     a s   s h o wn   by   hi g h e r   M D A   l e v e l s   i n   t h e   a ll o x a n   gr o up  c o m pa r e t t h e   n o r m a l   gr o up  ( p < 0. 0 5) .   M DA   l e v e l s   a f t e r   a ll o x a n   i ndu c t i o we r e   hi g h e r   i a l l   g r o ups   ( p < 0. 05 ) .   A d m i n i s t r a t i o n   o f   B C S O,   s im va s t a t i n   a n vi t a mi C   de c r e a s e d   t h e   M D A   l e ve l s .   M D m e a s ur e m e n t s   we r e   p e r f o r m e o da y   7   b e f o r e   a n d a y   9   a f t e r   a l l o x a n   i nduc t i o n .           F i g ur e   1.   M a l o n d i a l de hy de   l e v e l s   i n   S pr a gue   da w l e y   m i c e   be f o r e   a n a f t e r   a l l o x a n   i nduc t i o n   i n   a ll   gr o ups       M D A   l e v e l s   o f   t h e   s i m va s t a t i n ,   B C S O68   a n vi t a m i C   gr o ups   we r e   l o we r   t h a n   t h o s e   o f   a ll o x a gr o ups   ( p < 0. 05) .   T h e   s im va s t a t i n   gr o up  h a t h e   l o we s t   M DA   l e v e l s ,   f o l l o we by   t h e   B C S O68   a n t h e   vi t a mi C   gr o up s   ( p < 0. 05) .   T h e   pe r c e n t a ge   o f   de c r e a s e M D A   l e v e l s   c a n   be   s e e n   i F i gur e   2.   A c c o r d i n t F i g ur e   2,   t h e   s i m va s t a t i n   gr o up  h a t h e   hi g he s t   pe r c e n t a ge   o f   M D A   de c r e a s e   ( 53. 41% )   f o l l o we by   B C S O68   gr o up   ( 35 . 97% )   a n t h e   vi t a mi n   C   gr o up   ( 35. 83 % ) .   M DA   m e a s ur e m e n t s   we r e   pe r f o r m e o n   S pr a gue   da w l e mi c e   o n   t h e   3r d a y   a f t e r   a l l o x a n   i n duc t i o n .   S i m va s t a t i n ,   vi t a m i C ,   a n B C S c a n   s e r ve   a s   a n t i o xi da n t s   a n im m u n o m o dul a t or s   [ 23, 26 , 27 ] B C S a d mi n i s t r a t i o n   w i t h   e qu i va l e n t   do s e   o f   t hym o qu i n o n e   68  m g/ kgB W   s h o ws   l o we r   l e ve l s   o f   M D A .   T h e s e   r e s u l t s   a r e   c o ns i s t e n t   w i t h   pr e vi o u s   s t ud i e s   s h o w i n t h a t   B C S c a n   de c r e a s e   bl o o g l uc o s e   l e ve l s .   T h e   r e s u l t s   o f   t hi s   s t ud y   i nd i c a t e   t h a t   t h e   pa n c r e a t i c   d a m a ge   c a u s e by   a ll o x a n   i n   t h e   B C S gr o ups   w a s   l o we r   wh e c o m pa r e t o   t h e   a ll o x a n   gr o up.   P r e vi o us   r e s e a r c h   h a s   s h o wn  t h a t   t hy m o qu i n o n e   i n   B C S a c t s   a s   a a n t i o xi da n t   by   c a pt ur i n t h e   f r e e   r a d i c a l s   pr o duc e by   a ll o x a n   a n pr ot e c t i n pa n c r e a t i c   b e t a   c e l l s   f r o m   da m a ge   c a us e by   a ll o x a n   e x po s ur e   [ 14 ] .   B a s e o n   t h e   pe r c e n t a ge s   o f   M D A   de c r e a s e   i F i gu r e   2,   t h e   s i m va s t a t i n   gr o up  s h o ws   M DA   de c r e a s e   o f   up  to  53. 41% .   S i m va s t a t i n   h a s   a   s t r uc t u r e   l i ke   t hym o b e c a u s e   t h e r e   i s   a n   O gr o up  t h a t   a l l o w s   i t   t o   i nhi b i t   o xi da n t   f o r m a t i o n .   S e v e r a l   s t ud i e s   h a v e   a l s o   s ho wn   t h a s i m va s t a t i n   ha s   a n t i o xi da n t   a c t i vi t y ,   pr ot e c t s   l i p i pe r o xi d a t i o n ,   a n i nc r e a s e s   i t s   e f f e c t   o n   a n t i o xi da n t   de f e n s e s   [ 26. 28 ]   ( Ahm e e t   a l ,   2011) .   T h e   B C S O 68  gr o up  s h o ws   M DA   de c r e a s e   o f   up  t o   35 . 97% ,   s im il a r   to  t h e   vi t a m i C   gr o up.     Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
                                I S S N :   2252 - 8806   I J P HS    V o l .   7 ,   N o.   3 S e p t e m b e r   2018   207    21 5   2 12       F i gur e   2.   P e r c e n t a ge   o f   M D A   l e v e l s   de c r e a s e   a f t e r   a l l o xa n   i n duc t i o n   i n   t h e   t r e a t m e n t   gr o up s   ( B C S O,   s i m va s t a t i n ,   a n vi t a mi C )       3. 3 .     P an c r e at ic  p 53   E x p r e s s ion     I n   t hi s   s t ud y ,   pa n c r e a t i c   p53  e x pr e s s i o n   c a n   b e   o b s e r v e t h r o ugh   i mm u n o hi s t o c h e m i c a l   im a g i ng   w i t h   p53  a n t i b o d y   us i ng  a   l i g h t   m i c r o s c o pe   e qui p pe w i t h   o p t i l a b   ( 100x   m a g nif i c a t i o n ) .   T h e   p53  e x pr e s s i o n   i s   i nd i c a t e by   t h e   b r o wn   c o l o r   o f   t h e   c y t o pl a s m   a n t h e   n uc l e us .   M i c r o s c o pi c   p i c t ur e s   o f   p53  e x pr e s s i o n   a s   s h o w n   i n   F i gur e   3.   T h e   p53  e x pr e s s i o n   pe r c e n t a ge s   we r e   c a l c u l a t e by   c o m pa r i ng  c e ll s   e x pr e s s i ng  p53  ( b r o wn )   a n d   t h o s e   n on - e x pr e s s i ng  p53   a s   l i s t e i T a bl e   2.   F r o m   T a bl e   2,   i t   c a n   be   s e e n   t h a t   a l l o x a i n du c t i o a c t i v a t e s   t h e   p53  ge n e ,   i n d i c a t e by   a n   i nc r e a s e   i n   p53  e xpr e s s i o n   a f t e r   t h e   i n duc t i o n .   P 53  ge n e   a c t i v a t i o n   wa s   a l s o   de m o ns t r a t e by   a   p e r c e n t a ge   i n c r e a s e   i p53   e x p r e s s i o n   i t h e   a l l o xa n   gr o up  c o m pa r e t o   t h e   n o r m a l   gr o up  (p < 0. 05) .   B a s e o n   T a bl e   2,   t h e   i n c r e a s e   o f   p5 e x pr e s s i o n   i n   t h e   s o l ve n t   c o n t r o l   gr o up  to   n o r m a l   wa s   59. 90% ,   whi c h   m e a ns   t h a t   DM S s o l v e n t   i n c r e a s e p53  e x pr e s s i o n .   I n   t h e   a ll o x a n   gr o up,   t h e   i n c r e a s e   i n   p5 3   e x pr e s s i o n   r e a c h e 100%   c o m p a r e t o   t h e   n o r m a l   gr o up.   H o we v e r ,   t h e   i nc r e a s e   o f   p53   e x pr e s s io n   i t h e   a l l o x a n   gr o ups   wa s   l o we r   t h a n   t h a t   i n   t h e   B C S O,   s im va s t a t i n ,   a n vi t a mi C   gr o ups .   B C S i n c r e a s e s   t h e   p53  e x pr e s s i o n   i t he   a ll o x a n - i nduc e d   S r a t   pa nc r e a s   a s   s h o w n   by   a n   i nc r e a s e   o f   263%   ( B C S O6. 8)   a n 333%   ( B C S O68) .   T h e   i n c r e a s e   o f   p53  e x pr e s s i o n   i n   s im va s t a t i n   a n vi t a mi C   gr o ups   we r e   l o we r   a t   1 50%   a n 184%   r e s pe c t i v e ly   ( p < 0. 05) .   T hi s   s ugge s t s   t h a t   B C S O68  ha s   a   b e t t e r   e f f e c t   t h a n   s im va s t a t i n   a n vi t a m i C   in  e nh a nc i n p53  e x pr e s s i o n .   All o x a n   c o m po un ds   c a u s e   p53  ge n e   a c t i v a t i o n ,   f o l l o we by   o xi da t i v e   s t r e s s   a n pa n c r e a t i c   c e l l   de s t r uc t i o n   [ 10,   16,   17 ] .   Al l o x a n   i s   a   c y t o to xi c   d iab e t o ge ni c   c o m po un a g a i ns t   pa n c r e a t i c   i s l e t   c e l ls   t h r o ugh   t h e   f o r m a t i o n   o f   f r e e   r a d i c a l s .   O xi da t i v e   s t r e s s   a n d   a n   i nc r e a s e   i NF - ka ppa B   a c t i vi t y   i pa n c r e a t i c   i s l e t   c e l l s   tr i gge r   a n   i nf l a mm a t o r y   r e a c t i o n   [ 9 ] p 53  h a s   s e v e r a l   im po r t a n t   r o l e s   i r e gu l a t i n t h e   r e s po n s e   to  e nvi r o nm e n t a l   s t r e s s o r s   s uc h   a s   by   m o d if yi ng  c e l l   gr o wt h   a n c e ll u l a r   be h a v i o r   i r e s po ns e   t o   DN s t r e s s   a n i n f l a m m a t i o n   [ 17,   29,   30 ] .   P 53  i s   a c t i va t e by  DN A   da m a ge   i nduc e by   R OS  a n NO S   pr o duc e dur i n g   i n f l a m m a t i o n .   O xi da t i v e   s t r e s s   due   to   a l l o x a n   i n duc t i o n   c a u s e s   i nc r e a s e R OS  l e v e l s .   O xi da t i v e   da m a ge   c a us e by   f r e e   r a d i c a l s   h a s   im p l i c a t i o n s   i n   v a r i o u s   pa t h o l o g i c a l   c o n d i t i o n s ,   n a m e ly   da m a ge   t o   c e l l s ,   t i s s ue s ,   a n o r ga n s   s uc h   a s   l i ve r ,   k i d ne y s ,   pa n c r e a s ,   a n he a r t   i n   b o t h   h u m a n s   a n a nim a l s   [ 11,   12,   18 ] .   T hi s   da m a ge   m a y   c a us e   de a t h   o r   a c c e l e r a t i o n   o f   t h e   o n s e t   o f   v a r i o us   de ge n e r a t i v e   d i s e a s e s .   Due   t o   t h e   pot e n t i a l   t oxi c i t y   o f   f r e e   r a d i c a l   c o m po un d s ,   t h e   b o d y   h a s   a   n a t ur a l   de f e n s e   m e c h a ni s m .   E n do ge n o us   a n t i o xi d a n t   e n z ymes   s e r v e   to   n e ut r a l i z e   a n d   a c c e l e r a t e   t h e   de gr a da t i o n   o f   f r e e   r a d i c a l   c o m po un d s   t o   pr e v e n t   da m a g e   t o   m a c r o m o l e c u l a r   c o m po n e n t s   o f   t h e   c e ll .   S o m e   o f   t h e   f a c t o r s   t h a c a n   l e a t o   i n c r e a s e o xi da t i v e   s t r e s s   c o n d i t i o n s   i n c l ud e   e x e r c i s e ,   ps y c h o l o g i c a l   s t r e s s ,   a n i nf l a mm a t i o n   [ 9,   19 ] .       Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
I J P HS    I S S N:  2252 - 8806       B lack   C umin  Se e Oil   A nti diabetoge nic  by   I nc r e as ing  the  P anc r e ati c   p 53  E x pr e s s ion  ( A k r om )   213                         F i gur e   3.   M i c r o s c o pi c   ph o to s   o f   i mm u n o hi s t o c h e mi c a l   r e s u l t s   o f   p53  e x pr e s s i o n   o f   pa n c r e a t i c   o r ga n s   i n   S r a t s .   ( I V)   Al l o x a n   +   B C S 68  m K gB W ,   ( V)   Al l o x a n   +   S i m va s t a t i n ,   ( VI )   Al l o x a n   +   ( All o x a n   +   B C S 6. m K gB W ,   ( I V)   Al l o x a n   +   V i t a m i C ,   ( VI I )   S o l v e n t   C o n tr o l .                               un e x pr e s s e c e ll s ,                                         e x pr e s s e c e ll             Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
                                I S S N :   2252 - 8806   I J P HS    V o l .   7 ,   N o.   3 S e p t e m b e r   2018   207    21 5   214   T a bl e   2.   E x pr e s s i o n   o f   p53  i n   All o x a n - I n du c e d   S R a P a n c r e a s   a n A d mi ni s t r a t i o n   o f   B C S O,   S i m va s t a t i n   a n V i t a m i n   C   E x p e r im e n ta G r o up   P e r c e nt a ge s   of  p53  E x pr e s s io n   P e r c e nt a ge s  i n c r e a s e   of  p53  e x pr e s s io t o   N o r ma g r o up   N o r ma l   18.093±5.133   0 %   A ll ox a   36.193±2.293*   100,038 %   A ll ox a n+ B C S O 6.8 ml /k g B W   65.671±3.617^   262,964 %   A ll ox a n+ B C S O 68 ml /k g B W   78.355±3.278^   333,068 %   A ll ox a n+ S im v a s ta ti n   45.230±1.767^   149,986 %   A ll ox a n+ V it a mi n C   51.387±4.092^   184,016 %   D M S O  S o l ve nt     28.930±3.025   59,896 %   P S : * = <  0.05 to  n o r ma gr o up ^ = p< 0.05 to  a ll ox a n gr o up       4.   CONC L USI ON   All o x a n   i nduc t i o n   i nc r e a s e s   bl o o s uga r   l e v e l s ,   M a l o n d i a l de hy de   l e ve l s ,   a n p53  e x pr e s s i o n .   B l a c k   se e c u mi o i l   a t   a   do s e   o f   68  m g/ K gB W   c a n   r e d uc e   bl o o g l u c o s e   a n M D A   l e ve l s   a n i nc r e a s e   p a n c r e a t i c   p53  e x pr e s s i o n   i n   a ll o x a n - i nduc e S pr a gue   da w l e r a t s .       AC K NOWL E DGE M E NT S   T h e   R e s e a r c h   T e a m   e x pr e s s e t h e i r   gr a t i t ude   t C e n t e r   o f   R e s e a r c h   a n d   C o m m u ni t y   S e r vi c e   o f   Uni ve r s i t a s   Ahm a Da hl a n ,   a n M i n i s t r y   o f   R e s e a r c h   a n H i g he r   E duc a t i o n   o f   R e pu bli c   o f   I n do n e s ia  f o r   t h e   r e s e a r c h   f u n d i ng  a s s i s t a n c e .   T h e   t e a m   a l s o   t h a n ks   t h e   l a b   a s s i s t a n t s   a t   Ga dj a h   M a da   U ni ve r s i t y   t e s t i ng  a n d   r e s e a r c h   c e n t e r   f o r   t h e i r   a s s i s t a n c e   dur i n g   t h e   r e s e a r c h .       RE F E R E NC E S   [1 ]   I n t e rn at i o n a l   D i ab e t e s   F e d e rat i o n ,   D i ab e t e s   A t l as   6 t h   ed i t i o n ,   Br u s s   Bel g   I n t   D i ab e t e s   Fed ,   2 0 1 5 .     [2 ]   A s s o c i at i o n ,   AD. ,   In t ro d u c t i o n :   St an d ard s   o M ed i c a l   Care   i n   D i ab e t e s - 2 0 1 8 .   D i ab e t e s   Car e ,   1;41   (Su p p l emen t   1 )   : S1 2 ,   2 0 1 8 .   [3 ]   Fu ru k a w a .   S . ,   Fu j i t a .   T . ,   Sh i m ab u k u r o .   M . ,   Iw a k i .   M . ,   Y am a d a .   Y . ,   N ak a j i m a .   Y . ,   e t   al . ,   I n c r e as e d   O x i d at i v St re s s   i n   O b e s i t y   a n d   I t s   Im p ac t   o n   M e t ab o l i c   S y n d r o me ,   Cl i n   In ve s t ,   1 1 4 ( 1 2 ): 1 7 5 2 1 7 6 1 ,   2 0 1 7 .     [4 ]   Mas o n .   RP . ,   J a c o b .   RF. ,   E ffec t s   o O x i d at i v e   St re s s ,   H y p e r g l y cemi a ,   an d   H y p e r ch o l e s t e ro l emi o n   M em b ran St ru c t u ral   O rg an i zat i o n   a n d   t h I n t e ra c t i o n s   o O me g a - 3   Fat t y   A ci d s ”,   In :   M em b ran e   O rg an i zat i o n   a n d   D y n a mi c s .   Sp ri n g e r;   2 0 1 7 .   p .   3 1 4 7 .     [5 ]   G h e zzi .   P . ,   Fl o ri d i .   L . ,   Bo ras c h i .   D . ,   Cu ad ra d o .   A . ,   Man d a .   G . ,   L e v i c .   S . ,   e t   al . ,   O x i d at i v e   St re s s   an d   In fl a mm at i o n   I n d u ced   B y   E n v i r o n men t al   an d   Ps y ch o l o g i c a l   St r e s s o rs :   Bi o m ark e P e rs p ec t i v e ”,   A n t i o x i d   R ed o S i g n a l 2 8 ( 9 ): 8 5 2 8 7 2 ,   2 0 1 8 .     [6 ]   Liu .   Z . ,   Z h u .   Z . ,   Z h ao .   J . ,   R e n .   W . ,   Ca i .   Y . ,   W an g .   Q . ,   et   al . ,   Mal o n d i al d eh y d e :   A   N o v e l   Pr e d i c t i v Bi o m a rk e fo Po s t - St ro k e   D e p re s s i o n ,   A f f ect   D i s o r d ,   2 2 0 : 9 5 1 0 1 ,   2 0 1 7 .     [7 ]   Og \ l o d e k   E A .   T h e   R o l e   o PO N - 1 ,   G R,   I L - 1 8 ,   an d   O x L D L   i n   D e p r e s s i o n   w i t h   a n d   w i t h o u t   Po s t t rau m at i c   St re s s   D i s o rd e r ,   Ph a r m a co l   R ep ,   6 9 ( 5 ): 8 3 7 8 4 5 ,   2 0 1 7 .     [8 ]   Sch o o t s .   MH . ,   G o rd i j n .   SJ . ,   S c h e r j o n .   SA . ,   v an .   G o o r .   H . ,   H i l l e b ran d s .   J - L. ,   O x i d at i v e   S t re s s   i n   Pl a cen t al   P at h o l o g y ,   P l a cen t ,   2 0 1 8 .     [9 ]   A l a m .   MM . ,   M ee rza .   D . ,   N as eem .   I. ,   Pro t ec t i v e   E ffec t   o Q u e r ce t i n   o n   H y p e r g l y cemi a,   O x i d at i v e   St re s s   an d   D N A   D am a g e   i n   A l l o x an   I n d u ced   T y p 2   D i ab e t i c   Mi ce ,   Li f S ci ,   1 0 9 (1 ): 8 1 4 ,   2 0 1 4 .     [1 0 ]   V as u .   S . ,   M c C l e n a g h a n .   NH . ,   F l at t .   PR. ,   Mo l ecu l ar   M ec h a n i s m s   o f   T o x i c i t y   an d   C el l   D a m ag b y   C h em i c a l s   i n   H u m an   P a n c r e at i c   B e t C el l   L i n e ,   1 . 1   B4 ,   P a n cr ea s ,   4 5 (9 ): 1 3 2 0 1 3 2 9 ,   2 0 1 6 .     [1 1 ]   A b d u l - Mu n ee r .   PM . ,   Ch a n d ra .   N . ,   H ao ra h .   J. ,   In t e ra c t i o n s   o f   O x i d at i v e   St r e s s   an d   N e u r o v as c u l ar  In fl a mm at i o n   i n   t h e   Pat h o g e n e s i s   o T rau m at i c   Bra i n   I n j u r y ,   M o l   Neu r o b i o 5 1 ( 3 ): 9 6 6 9 7 9 ,   2 0 1 5 .     [1 2 ]   D u rg a .   KD . ,   A d h i s i v a m .   B . ,   V i d y a .   G . ,   V i s h n u   Bh at .   B . ,   Bo b b y .   Z . ,   C h an d .   P. ,   O x i d at i v e   St r e s s   an d   D N A   D am a g e   i n   N ew b o r n s   Bo rn   t o   Mo t h e rs   w i t h   H y p e r g l y c e mi a Pro s p e c t i v e   C o h o rt   St u d y ,   M a t er n   F et a l   Ne o n a t a l   Me , 1 6 ,   2 0 1 7 .     [1 3 ]   A g ra w a l .   N . ,   H i w al e .   S. ,   O x i d at i v e   St re s s   i n   D i ab e t e s   Me l l i t u s   Pat i en t s :   A   St u d y   of   Ma l o n d i al d e h y d e   (M d a)  a nd  I s ch em i a   Mo d i f i e d   A l b u mi n   ( Im a)  a s   I n d i c at o rs   of   O x i d at i v St re s s ,   G l o b   R es   A n a l ,   7 (3 ),   2 0 1 8 .     [1 4 ]   T am u ra .   K . ,   Mi n a m i .   K . ,   K u d o .   M . ,   Iemo t o .   K . ,   T ak a h as h i .   H . ,   S ei n o .   S. ,   L i rag l u t i d e   I m p ro v e s   Pan c r e at i c   Be t Ce l l   Mas s   an d   Fu n c t i o n   i n   A l l o x an - i n d u ced   D i ab e t i M i ce ,   P l o S   O n e , 1 0 (5 ): e 0 1 2 6 0 0 3 ,   2 0 1 5 .     [1 5 ]   Og \ l o d e k   E A . ,   Ch an g e s   i n   t h e   Co n cen t rat i o n s   o In fl a mm at o r y   an d   O x i d at i v e   St at u s   Bi o med i at o rs   (M I P - 1   α ,   PMN   e l as t as e ,   MD A ,   an d   IL - 1 2 i n   D e p re s s ed   Pat i en t s   W i t h   an d   W i t h o u t   Po s t t r au m at i c   St r e s s   D i s o rd e r ,   P h a r m a co l   R ep ,   2 0 1 7 .   [1 6 ]   D ek an t y .   A . ,   Barri o .   L . ,   Mi l a n .   M. ,   Co n t ri b u t i o n s   o D N A   R e p ai r,   C e l l   C y c l e   Ch eck p o i n t s   A n d   Cel l   D e at h   t o   Su p p re s s i n g   t h e   D N A   D a m a g e - I n d u ced   T u m o r i g en i c   B eh av i o r   o D r o s o p h i l E p i t h el i a l   C e l l s ,   O n co g en e ,   3 4 ( 8 ): 9 7 8 ,   2 0 1 5 .     Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
I J P HS    I S S N:  2252 - 8806       B lack   C umin  Se e Oil   A nti diabetoge nic  by   I nc r e as ing  the  P anc r e ati c   p 53  E x pr e s s ion  ( A k r om )   215   [1 7 ]   St ew art - O rn s t e i n .   J . ,   L ah a v .   G. ,   p 5 3   D y n a m i c s   i n   Res p o n s e   t o   D N A   D a m ag e   V ar y   A c ro s s   Cel l   L i n e s   an d   are  Sh ap e d   b y   E ff i c i en cy   o D N A   R e p ai r   a n d   A c t i v i t y   o t h e   K i n as e   A T M ,   S ci   S i g n a l ,   1 0 ( 4 7 6 ): e aah 6 6 7 1 ,   2 0 1 7 .     [1 8 ]   K u m ar .   P . ,   Ra m an .   T . ,   S w ai n .   MM . ,   Mi s h ra .   R . ,   Pal .   A. ,   H y p e r g l y cemi a - i n d u ced   O x i d at i v e - N i t ro s at i v e   St re s s   I n d u ce s   In fl a mm at i o n   a n d   N e u r o d eg e n e rat i o n   v i A u g me n t e d   T u b e r o u s   S c l e r o s i s   Co m p l e x - 2   (T SC - 2 ac t i v at i o n   i n   n eu ro n al   ce l l s ,   M o l   Neu r o b i o l 5 4 (1 ): 2 3 8 2 5 4 ,   2 0 1 7 .     [1 9 ]   Sch i e b e r .   M . ,   C h an d e l .   N S. ,   RO Fu n c t i o n   i n   R ed o x   Si g n al i n g   an d   O x i d at i v e   S t re s s ,   Cu r r   B i o l ,   2 4 ( 1 0 ): R4 5 3 R4 6 2 ,   2 0 1 4 .   [2 0 ]   A h m ad .   A . ,   H u s ai n .   A . ,   Mu j ee b .   M . ,   K h a n .   SA . ,   N aj mi .   AK . ,   S i d d i q u e .   NA . ,   e t   al . ,   R e v i ew   o n   T h e rap e u t i Po t en t i al   of   N i g el l a   s at i v a:   A   mi ra c l e   h e rb , "   A s i a n   P a Tr o p   B i o m ed , 3 (5 ): 3 3 7 3 5 2 ,   2 0 1 3 .     [2 1 ]   L u t t e ro d t .   H . ,   L u t h e r .   M . ,   S l av i n .   M . ,   Y i n .   J - J . ,   Parr y .   J . ,   G ao .   J - M . ,   e t   a l . ,   Fat t y   A c i d   Pr o fi l e ,   T h y mo q u i n o n e   Co n t en t ,   O x i d at i v e   St ab i l i t y ,   an d   A n t i o x i d an t   Pro p e rt i es   o Co l d - Pre s s ed   Bl a ck   Cu mi n   S eed   O i l s ,”   L W T - F o o d   S c i   Tech n o l 4 3 (9 ): 1 4 0 9 1 4 1 3 ,   2 0 1 0 .     [2 2 ]   Ram ad a n .   MF . ,   K r o h .   LW . ,   rs e l .   J - T. ,   Rad i c al   S c av en g i n g   A c t i v i t y   o Bl a ck   Cu mi n   ( N i g e l l s at i v L . ),   C o ri an d e (C o ri a n d r u m   s at i v u L . ),   an d   N i g e r   (G u i z o t i ab y s s i n i c Cas s . C r u d e   Seed   O i l s   an d   O i l   F ra c t i o n s ,   A g r i F o o d   Ch em ,   5 1 (2 4 ): 6 9 6 1 6 9 6 9 ,   2 0 0 3 .     [2 3 ]   Bu ri t s .   M . ,   B u c ar .   F. ,   A n t i o x i d an t   a c t i v i t y   o N i g e l l s at i v E s s en t i al   O il   P h yt o t h er   R es , 1 4 (5 ): 3 2 3 3 2 8 .     [2 4 ]   H i d a y at i .   T . ,   H ab i b .   I . ,   A k r o m .   A. ,   A n t i i mmu n o t o x i o B l a c k   C u m i n   S eed   O i l   (N i g el l a   s at i v O i l )   i n   D M BA   (D i me t h y l b en zan t ra ce n e ) - In d u ce d   M i ce ,”   2015;    [2 5 ]   A k ro m .   A . ,   D ar m a w a n .   E . ,   Y u h el v i a .   L. ,   Bl ac k   Cu mi n   S ee d   O i l as   H e p at o p ro t ec t o i n   D ec r e as i n g   SG PT   a nd  SG O T   A c t i v i t y   a n d   In c r e as i n g   P5 3   G en e   E x p re s s i o n   i n   Sp rag u e   D a w l ey   Rat s   I n d u ced   b y   A l l o x an   In t   P u b l i c   H ea l t h   S ci   IJP H S 4 (3 ): 1 59 1 6 3 ,   2 0 1 5 .     [2 6 ]   E g e r .   GA . ,   F e rr e i ra .   VV . ,   Bat i s t a .   CR . ,   Bo n d e .   H . ,   L i m a .   DD .   D e . ,   W y s e .   AT . ,   e t   al . ,   A n t i o x i d a n t   E ff ec t   o Si m v as t at i n   T h ro u g h t   O x i d at i v e   Im b al an ce   Ca u s ed   b y   L i s d e x am f e t ami n D i m e s y l at e   A n   A ca d   B r a s   Ci ê n c ,   8 8 ( 1 ): 3 3 5 3 4 8 ,   2 0 1 6 .     [2 7 ]   T h o s ar .   SS . ,   Bi e l k o .   SL . ,   W i g g i n s .   CS . ,   K l au n i g .   JE . ,   Mat h e r .   KJ . ,   W al l a ce .   J P. ,   A n t i o x i d a n t   V i t ami n   Pr ev en t s   D ecl i n e   i n   E n d o t h el i a l   F u n c t i o n   D u r i n g   S i t t i n g   M ed   S ci   M o n i t   In t   M ed   E xp   Cl i n   R es 2 1 : 1 0 1 5 ,   2 0 1 5 .     [2 8 ]   Z h an g .   G . ,   L i .   M . Xu .   Y . ,   P en g .   L . ,   Y a n g .   C . ,   Z h o u .   Y . ,   e t   al . ,   A n t i o x i d at i o n   E ff e c t   of   Si mv as t at i n   in   A o rt an d   H i p p o c a m p u s :   A   Rab b i t   Mo d e l   F ed   H i g h - C h o l e s t e ro l   D i e t   O xi d   M ed   Cel l   Lo n g ev ,   2 0 1 6 .     [2 9 ]   Co o k s .   T . ,   Pat e ras .   IS . ,   T arc i c .   O . ,   S o l o m o n .   H . ,   S c h et t e r .   AJ . ,   W i l d e r .   S . ,   e t   al . ,   Mu t an t   p 5 3   Pro l o n g s   N F - κ A c t i v at i o n   a n d   Pr o m o t e s   Ch r o n i c   I n f l a mm at i o n   an d   In fl a mm at i o n - as s o ci at ed   C o l o r ec t al   C an ce r   Ca n cer   Cel l ,   2 3 ( 5 ): 6 3 4 6 4 6 ,   2 0 1 3 .     [3 0 ]   G u d k o v .   AV . ,   G u ro v a .   KV . ,   K o m aro v a .   E A . ,   I n f l a mm at i o n   an d   p 5 3 :   T al e   o T w o   S t re s s e s ,   G en es   Ca n cer 2 (4 ): 5 0 3 5 1 6 ,   2 0 1 1 .       Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.