I nte rna t io na l J o urna l o f   E lect rica l a nd   Co m p ute E ng in ee ring   ( I J E CE )   Vo l.   9 ,   No .   4 A u g u s t   201 9 ,   p p .   2 4 6 0 ~ 2 4 6 8   I SS N:  2088 - 8708 DOI : 1 0 . 1 1 5 9 1 / i j ec e . v 9 i 4 . p p 2 4 6 0 - 2468           2460       J o ur na l ho m ep a g e h ttp : //ia e s co r e . co m/ jo u r n a ls /in d ex . p h p / I JE C E   Liv e and  dea d cel ls co unting   f ro m   m icro sco pic  t ry p a n blue  sta ining  i m a g es   u sing   thresho ldin g   a nd  m o rp ho lo g ica   o pera tion tech niq ues       Su   M o n Aung 1 K a ny a na t t   K a no k w iro o n 2 T o ng ha t ha i   P ha ira t a na 3 Su ra po ng   Cha t pu n 4   1, 3 ,4 I n stit u te  o f   Bio m e d ica En g in e e rin g ,   F a c u lt y   o f   M e d icin e ,   P ri n c e   o f   S o n g k la Un iv e rsit y ,   T h a il a n d   2 De p a rt m e n o f   Bio m e d ica S c ien c e s,  F a c u lt y   o f   M e d icin e ,   P ri n c e   o f   S o n g k la Un iv e rsity ,   T h a il a n d       Art icle  I nfo     AB ST RAC T     A r ticle  his to r y:   R ec eiv ed   J u n   4 ,   2 0 1 8   R ev i s ed   Ma r   1 5 ,   2 0 1 9   A cc ep ted   Ma r   2 2 ,   2 0 1 9       Ce ll   c o u n ti n g   is  a   re q u ired   p r o c e d u re   in   b i o m e d ica e x p e ri m e n ts   a n d   d ru g   tes ti n g .   M a n u a c e ll   c o u n ti n g   p e rf o r m e d   w it h   a   h e m o c y to m e ter  is  ti m e   c o n su m in g   a n d   in d iv id u a d e p e n d e n c e .   T h is  stu d y   re p o rted   th e   d e v e lo p m e n t   o f   a   c o m p u ter - a ss isted   p ro g ra m   f o tr y p a n   b lu e   sta in e d - c e ll   c o u n ti n g   u sin g   d ig it a ima g e   a n a l y sis.   I m a g e s   o tr y p a n   b lu e - sta in e d   b re a st  c a n c e c e ll li n e   w e r e   o b tain e d   b y   a   m icro sc o p e   w it h   a   d ig it a c a m e ra .   Un d e sire d   n o ise   a n d   d e b ris  w e re   re m o v e d   b y   a p p ly in g   a   g u id e d   im a g e   f il ter.  Co lo sp a c e   HSV   (Hu e ,   S a tu ra ti o n   a n d   V a l u e c o n v e rsio n   a n d   g ra y s c a le  c o n v e r sio n   w e re   p e rf o r m e d   f o d isti n g u ish in g   b e tw e e n   li v e   a n d   d e a d   c e ll s.    I m a g e   th re sh o l d i n g   a n d   m o rp h o l o g ica o p e ra to rs  w e re   a p p li e d   f o im a g e   se g m e n tatio n .   L iv e   a n d   d e a d   c e l ls  w e re   c o u n ted   a f ter  ima g e   se g m e n tatio n   a n d   th e   re su l ts  w e re   c o m p a re d   w it h   m a n u a c o u n ti n g   b y   th re e   w e ll - e x p e rien c e d   c o u n ters .   T h e   c o m p u ter - a ss isted   c e ll   c o u n ti n g   f ro m   th irt y - si x   try p a n   b lu e - sta in e d   m icro sc o p ic  ima g e h a d   a   h ig h   c o rre latio n   c o e ff icie n t   w it h   th e   li v e   c e ll   re su lt s o f   th e   e x p e rts  (r= 0 . 9 9 ).   T h e   c o rre latio n   c o e ff ici e n o th e   n u m b e o f   d e a d   c e ll c o m p a rin g   th e   c o m p u ter - a ss isted   c o u n a n d   th e   e x p e rts’  c o u n t   w a 0 . 7 4 .   Ou a p p r o a c h   o f f e rs  h ig h   a c c u ra c y   ( > 8 5 % o n   c o u n t in g   li v e   c e ll c o m p a re d   w it h   th e   e x p e rts’  c o u n ti n g .   T h is   a u to m a ted   c e ll   c o u n t in g   a p p ro a c h   c a n   a ss ist  b io m e d ica re s e a rc h e rs   f o b o th   li v e   a n d   d e a d   c e ll s c o u n ti n g .     K ey w o r d s :   C ell  co u n ti n g   Gu id ed   i m a g f ilter   I m ag t h r es h o ld in g   Mo r p h o lo g ical  o p er ato r   T r y p an   b lu e   Co p y rig h ©   2 0 1 9   In stit u te o A d v a n c e d   E n g i n e e rin g   a n d   S c ien c e   Al rig h ts re se rv e d .   C o r r e s p o nd ing   A uth o r :   Su r ap o n g   C h atp u n ,     I n s tit u te  o f   B io m ed ical  E n g in ee r in g ,   Facu lt y   o f   Me d ici n e,   P r in ce   o f   So n g k la  U n i v er s it y ,   15   Kan j an a v an ich   R o ad ,   Hat y ai,   So n g k h la   9 0 1 1 0 ,   T h ailan d .   E m ail:  s u r ap o n g . c@ p s u . ac . th       1.   I NT RO D UCT I O N     I n   ca n ce r   d r u g   d is co v er y   r ese ar ch es,  m a n y   asp ec ts   o f   n o v e d r u g   tr ea t m en t s   o n   ca n ce r   c ells   h av e   b ee n   s tu d ied ,   in cl u d in g   m o r p h o lo g ical  an d   ce ll u lar   s tr u c tu r ch an g e s   an d   d r u g   r esp o n s e   [ 1 - 3 ] .   On s i m p le  in v e s ti g atio n   to   ev al u ate  t h e f f icac y   o f   ca n ce r   d r u g   tr ea t m e n ts   i s   t h id en t if icatio n   o f   ap o p to tic  ce lls   an d   li v e   ce lls   [ 4 ] .   A p o p to s is   is   p r o g r a m m ab le  ce l d ea th ,   wh ich   ca n   b ca te g o r icall y   o b s er v ed   f r o m   ce ll   m o r p h o lo g ical  c h a n g e s .   C o u n tin g   v iab le  ce lls   o r   liv e   ce lls   p er   to tal  ce lls   a f ter   i n   v itro   d r u g   tr ea t m e n i s   a   co m m o n   tas k   f o r   b io lo g is t s   an d   b io m ed ical  r esear ch er s   w h en   t h e y   e v al u ate  th e f f icac y .   Ma n u al  ce ll  co u n ti n g   b y   b io m ed ical  ex p er w it h   tall y   co u n ter   is   co n v e n tio n al  m et h o d   b u th co u n ti n g   r esu lt  i s   an   in d iv id u al  d e p en d en ce ,   a n d   it   is   ted io u s   an d   ti m e - co n s u m i n g .   T o   o v er co m t h d r a w b a ck s   o f   m an u al  ce l l   co u n ti n g ,   s e v er al  s o f t w ar p ac k ag e s   s u c h   as   I m a g eJ ,   Fij i,  C ellP r o f iler T M,   C ellC ,   I m ag e - P r o   P lu s   a n d   Me taM o r p h ®,  h av d e v elo p ed   p lu g in s   f o r   ce ll a n al y s is   a n d   ce ll c o u n t i n g   [ 5 - 1 1 ] .     Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
I n t J   E lec  &   C o m p   E n g     I SS N:  2088 - 8708       Live  a n d   d e a d   ce lls   co u n tin g   f r o micro s co p ic  tr yp a n   b lu s ta in in g   ima g es u s in g     ( S u   Mo n   A u n g )   2461   C o m p u ter - as s i s ted   ce ll  co u n tin g   u s i n g   i m a g p r o ce s s i n g   an d   an al y s is   h as  b ee n   co n ti n u o u s l y   d ev elo p ed   an d   im p r o v ed   to   p r o v id th r eq u ir em e n t s   o f   h ig h   r eliab ilit y ,   s p ec i f icit y   an d   s en s iti v it y   f o r   d if f er e n ce ll  t y p es  an d   test   p r o to co ls .   Fo r   ex a m p le,   Su et  a l.  [ 1 2 ]   d ev elo p e d   ce ll   co u n ti n g   m et h o d   f o r   h o s ce lls   i n   b r ig h f ield   f o r   in s ec t c ells   b y   u s in g   n o n lin ea r   tr a n s f o r m ed   s l id in g   b an d   f ilter .   T h e y   o b tai n ed   lo w   er r o r   r ate  an d   h ig h   ac cu r ac y   w h e n   co m p ar in g   th eir   m eth o d   w it h   m a n u a co u n t in g .   A   ce ll  co u n ti n g   m et h o d   f o r   w h ite  b lo o d   ce lls   w a s   d ev elo p ed   u s in g   Ma tlab   to   ev a lu a te  h e m atic  p ath o lo g ies  i n   ter m s   o f   n u m b er s ,   s ize s   an d   t y p e s   o f   w h ite   b lo o d   ce lls   [ 1 3 ] .   T h e y   ap p lied   i m a g e   en h an ce m e n t   an d   i m a g s e g m e n tat io n   a s   p r e - p r o ce s s in g   s tep s   a n d   u s ed   n eu r al   n et w o r k   f o r   clas s i f icat io n .   P iccin i n i   et  al.   [ 1 4 ]   u s ed   f u l l y   au to m ated   m o s aici n g   m eth o d   to   i m p r o v e   th r eliab ili t y   a n d   r ep r o d u cib ilit y   o f   li v a n d   d ea d   ce ll  co u n ti n g .   Mo u el h a n d   co lleag u e s   [ 1 5 ]     also   d escr ib e d   au to m atic  i m a g s e g m en ta ti o n   w it h   ac ti v co n to u r   f o r   s tai n ed   n u cle in   b r ea s ca n ce r   tis s u w h ic h   co u ld   s eg m en t to u c h in g   n u cle i to   g et  t h to tal  n u m b er   o f   b r ea s t c an ce r   n u clei.     T h q u alit y   o f   li g h m icr o s co p y   d i g ital  i m ag e s   tak e n   f r o m   h e m o c y to m e tr y   s i g n i f ican tl y   i n f lu e n ce s   v is u al  a n al y s i s ,   in cl u d in g   ce ll   co u n ti n g .   T h er ef o r e,   m o s li g h m icr o s co p y   d i g ital  i m a g e s   n ee d   to   u n d er g o   a   p r e - p r o ce s s in g   s tep   b ef o r ce l s e g m e n tat io n   i s   p er f o r m ed .   No is f ilter i n g   is   o n o f   t h p r e - p r o ce s s in g   s tep s   in   e v er y   d i g ital  i m a g p r o ce s s in g   tech n iq u e.   A   m e d ia n   f ilter   is   p o p u lar   n o is f il ter   w h ic h   is   u s ed   to   r e m o v e   s alt  an d   p ep p er   n o is i n   d ig i ta i m a g es  [ 1 6 - 1 9 ]   .   I h as  b ee n   r ep o r ted   th at  i m p u l s n o i s in   h ig h - d en s it y   n o i s y   i m a g es  ca n   b e f f ec ti v el y   r em o v ed   b y   u s i n g   an   i m p r o v e d   alg o r ith m   s u c h   a s   d ec is i o n   b ased   ad ap tiv e   n eig h b o r h o o d   m ed ian   f ilter   [ 2 0 ] .   Ma h m o o d   an d   Ma n s o r   [ 2 1 ]   u s ed   m o r p h o lo g ica to o w i th   th e   Ho u g h   tr an s f o r m   tech n iq u to   d etec an d   esti m ate  t h n u m b er   o f   r ed   b lo o d   ce lls   in   b lo o d   s a m p le  i m a g es.   L ie w   et  al.   [ 2 2 ]   ap p lied   im a g e   p r o ce s s in g   m e t h o d s   to   d ev elo p   p r o to ty p f o r   ce ll  d etec tio n   alg o r it h m   u s in g   cir cu lar   Ho u g h   tr an s f o r m   to   d etec th n u m b er   o f   ce lls   i n   b ee   co m b s   f r o m   d ig ital  i m a g es.  A lt h o u g h   th er ar e   m an y   m et h o d s   f o r   ce ll  d etec t io n   an d   ce ll  co u n ti n g ,   co m p u ter - as s is ted   ce l co u n ti n g   m et h o d s   ar s t ill  b ei n g   d ev elo p ed   to   im p r o v t h co u n ti n g   ac c u r ac y   a n d   to   m atc h   w it h   n e w   ap p licatio n s .   Fu r t h e r m o r e,   th er is   f e w   au to m ated   co u n ti n g   s o f t w ar f o r   tr y p an   b lu s tai n ed   ce lls   i n   b io m ed ical  r esear c h .   I n   th i s   p ap er ,   w d ev elo p ed   an   au to m ated   co u n t in g   ap p r o a ch   f o r   tr y p an   b lu e - s tai n ed   ce lls   w h ic h   i s   b ased   o n   s i m p le  d ig ital  i m ag p r o ce s s in g   tech n iq u es  in c lu d in g   i m ag n o is r ed u ctio n ,   i m ag e n h a n ce m e n t,   i m a g s e g m en ta tio n   a n d   i m ag m o r p h o lo g ical  o p er atio n s .   T o   ev alu ate  th e f f ec ti v en e s s   o f   o u r   ap p r o ac h ,   b o th   liv a n d   d ea d   ce lls   w er q u a n t if ied   u s i n g   t h i s   p r o p o s ed   m eth o d   an d   co m p ar ed   w it h   m an u al   co u n ti n g   b y   t h r ee   w ell - e x p er ien ce d   co u n ter s   an d   I m a g eJ ,   o p en s o u r ce   s o f t w ar e.       2.   RE S E ARCH   M E T H O D     2 . 1 .   Sa m p le  prepa ra t io n a nd   i m a g a cqui s it io n   A   h u m a n   b r ea s ca n ce r   ce ll   lin ( MD A - MB - 231 )   p u r ch ased   f r o m   t h Am er ica n   T y p C u lt u r e   C o llectio n   ( A T C C ,   C a n ad a )   w a s   u s ed   as   an   e x a m p le  i n   t h is   s t u d y An   o v er v ie w   o f   t h s t u d y   p r o ce d u r i s   s h o w n   i n   F ig u r 1 T h s a m p l p r ep ar atio n   g en er all y   f o llo wed   th p r o ce d u r o f   P ic ci n i n et  al .   [ 14 ] .   I n   b r ief ,   th ce lls   w er d etac h ed   f r o m   th f las k   b y   s h o r ex p o s u r to   tr y p s in / E DT A ,   w as h ed   in   t h cu lt u r m ed ia  b y   ce n tr if u g atio n   a n d   r e - s u s p en d ed   in   5   m L   o f   f r es h   m ed i u m Af ter   tr y p s in iza tio n ,   th ce lls   w er s tain ed   w ith   tr y p an   b lu s o l u tio n   an d   th e n   2 0   µL   o f   th i s   m i x t u r w as p la ce d   in   h e m o c y to m e ter   co u n t in g   c h a m b er           Fig u r 1 T r y p an   b lu e - s tai n ed   MD A - MB - 2 3 1   ce lls   in   t h h e m o c y to m eter   Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
                      I SS N :   2 0 8 8 - 8708   I n t J   E lec  &   C o m p   E n g ,   Vo l.  9 ,   No .   4 A u g u s t   201 9   :   2 4 6 0   -   2468   2462   I m ag e s   o f   th s tain ed   ce ll s   w e r o b tain ed   b y   an   in v er ted   Ol y m p u s   I X5 1   m icr o s co p eq u ip p ed   w i th   d ig ital  Ol y m p u s   DP 7 2   ca m er w i th   2 / 3 - in c h   C C D T h i m ag e s   w er ac q u ir ed   in   t h b r ig h f ield   b y   u s in g   Ol y m p u s   UP L an F L   1 0 x 0 . 1 3   as  s tan d ar d   o b j ec tiv len s A n   e x a m p le  o f   d ig ital  tr y p an   b lu e - s tai n ed   ce ll   i m a g es  is   s h o w n   i n   Fi g u r e   2 T h i m ag e s   w er cr o p p e d   t o   1 6 - s q u ar g r id   an d   th e n   i m ag p r o ce s s i n g   an al y s is   w as p er f o r m ed   as s h o w n   i n   th ce ll c o u n ti n g   ap p r o a ch   f lo w c h ar t a s   p r esen ted   in   F ig u r e   3 .           Fig u r 2 An   e x a m p le  o f   an   o r ig i n al  tr y p a n   b lu e s tai n ed   i m a g e       Fig u r 3 Ov er v ie w   o f   th i m a g p r o ce s s in g   f o r   liv an d   d ea d   ce lls   co u n ti n g       2 . 2 .     I m a g f ilte ring   I n   o u r   s tu d y ,   t h er ar p iles   o f   d eb r is   ( d ar k   s p o ts in   tr y p a n   b lu e - s tain ed   m icr o s co p ic  i m a g es  f r o m   th h e m o c y to m eter   w h ich   ca n   ca u s e   ce ll  ar ti f ac t s   as   s h o w n   i n   Fi g u r 2 W ap p lied   g u id ed   i m a g f ilter   t h at   s p atiall y   d is tr ib u ted   th f ilter i n g   s tr e n g th s   w ith   lo w - le v el  f ea tu r es  to   th i m a g to   s m o o th   an d   r e m o v th e   s m al d eb r is   f r o m   b ac k g r o u n d   in cl u d in g   m ai n tai n in g   t h ed g f ea t u r e s   o f   i m a g a n d   in tr o d u ci n g   less   ar tif ac ts   [ 2 3 ,   2 4 ] .   T h f ilter in g   p r o ce s s   n ee d s   co n s tr ain t s   f r o m   t h in p u p   to   d eter m i n th lin ea r   co ef f icien ts   ( a k ,   b k ) .   T h f ilter in g   o u tp u q   is   lin ea r   tr an s f o r m   o f   t h g u id an ce   I   in   w i n d o w   k   ce n ter ed   at  th p ix el  k   s in ce   t h i n p u t p   n ee d s   to   s u b t r ac t so m u n w a n ted   co m p o n e n ts   n   s u ch   a s   n o is e / tex tu r es a s   f o llo w s :     q i   =   a k I   i   +   b k i k     ( 1 )   q i   =   p i   -   n i   ( 2 )     Fu r t h er m o r e,   th n ei g h b o r h o o d   s ize  ar o u n d   ea ch   p i x el  as  a   s ca lar   o r   t w o - e le m e n v ec to r ,   [ M,   N w as  30   to   r e m o v s m all  d eb r is   in   t h b ac k g r o u n d     2 . 3 .     Co lo r   s pa ce   a nd   g ra y s c a le  co nv er s io n   I n   o u r   s t u d y ,   w co n v er ted   a   co lo r   s p ac o f   t h tr y p a n   b l u s tai n ed   i m ag e s   w h ic h   w as   o r ig i n all y   R GB   i m a g es  b y   ap p l y i n g   H S V   ( Hu Sat u r atio n   a n d   Valu e )   co lo r   s p ac e T h HSV  co lo r   s p ac is   q u ite  s i m ilar   to   th w a y   i n   w h ic h   h u m a n s   p er ce iv co lo r   an d   m o r s u ita b le  f o r   i m a g s eg m e n tatio n   a n d   an al y s is   t h a n   t h e   R GB   m o d el T h HSV  co n v er ted   im a g es  w er th e n   u s ed   to   p er f o r m   liv ce ll s   s eg m e n t atio n Fu r t h er m o r e,   th o r ig i n al  R GB   i m a g es  w er e   also   co n v er ted   to   g r a y s ca le  f o r   d ea d   ce lls   d etec tio n     2 . 4 .     I m a g s eg m ent a t io n   T h s eg m en ta tio n   s tep   is   v er y   cr u cial   b ec au s th ac c u r a c y   o f   t h s u b s eq u en p r o ce s s es  m ai n l y   d ep en d s   o n   th co r r ec s eg m e n tatio n P r io r   t o   im a g s e g m e n tatio n ,   t h b r ig h tn e s s   o f   HSV  co n v er ted   i m ag e   is   ad j u s ted   f o r   g etti n g   t h b etter   co n tr ast Ou r   ap p r o ac h   u til ized   Ots u s   th r es h o ld in g   m et h o d   to   ex tr ac t   f o r eg r o u n d   ( liv ce lls f r o m   t h b ac k g r o u n d   an d   to   tu r n   th im a g to   b lack   an d   w h ite  [ 25 ] .   As  o u r   tr y p an   b lu e - s tai n ed   m icr o s co p ic  i m a g es  s till   co n tain ed   co u n ter f eit   s t r u ct u r es  i n   t h n u clei,   h o wev er ,   w h ic h   ca u s ed   d if f ic u lt y   f o r   ex tr ac tio n   a n d   s eg m en tatio n T o   elim i n ate  th i s   d r a w b ac k ,   t w o   o p er atio n s   b ased   o n   Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
I n t J   E lec  &   C o m p   E n g     I SS N:  2088 - 8708       Live  a n d   d e a d   ce lls   co u n tin g   f r o micro s co p ic  tr yp a n   b lu s ta in in g   ima g es u s in g     ( S u   Mo n   A u n g )   2463   m o r p h o lo g ical  r ec o n s tr u ctio n   w er u s ed   o p en in g   a n d   d ilati o n T h f ir s o p er atio n   r e m o v es  th d i s co n n ec ted   b r ig h t   o b j ec ts   th at  ar s m a ll er   th an   th s tr u ct u r i n g   e le m e n [ 26 ] .   Si m ilar l y ,   t h s ec o n d   o n r e m o v es   th e   d is co n n ec ted   d ar k   o b j ec ts   s m a ller   th an   t h s tr u ct u r in g   ele m e n t A   d is k - s h ap ed   s tr u ctu r i n g   ele m e n w it h   r ad iu s   n ”  w as   ass ig n ed   i n   t h al g o r ith m T h am o u n o f   d etail   p r esen ted   i n   t h i m a g d ep en d s   o n   t h s ize  o f   t h e   s tr u ct u r in g   ele m e n w it h   r ad iu s   n ”.     Fu r th er m o r e,   w ap p lied   th ef f ec tiv th r e s h o ld   v alu f r o m   th e   h is to g r a m   o f   g r a y s ca le  i m ag to   o b tain   o n l y   d ea d   ce lls   in   t h b lack   an d   w h ite  i m a g e .     2 . 5 .     Ce ll c o un t ing   T h p r o ce s s   o f   co u n tin g   t h ce lls   w as  ac h iev ed   b y   ap p l y i n g   t h lab eli n g   tec h n iq u to   th b in a r y   i m a g es  a f ter   th r es h o ld in g   to   d is tin g u is h   o b j ec ts   f r o m   th b ac k g r o u n d   an d   th e n   w m ea s u r ed   th g eo m etr i c   p r o p er ties   u s in g   ce n tr o id   an d   b o u n d ar y   t o   s elec t   liv a n d   d ea d   ce lls   f r o m   lab eled   r eg io n s .   Fu r t h er m o r e,   t h co u n ti n g   r es u lts   b y   o u r   ap p r o ac h   w er e   co m p ar ed   to   th e   m an u al   co u n ti n g   b y   t h r ee   e x p er ts   a s   w ell  as  co m p ar i n g   to   au to m atic  ce ll  co u n tin g   w it h   I m ag eJ   u s in g   C e llC o u n tin g Ma cr o 2 - v1 . 01 . ij m   ( o p en - s o u r ce   s o f t w ar e ).       3.   RE SU L T S AN D I SCU SS I O N   T h test in g   w a s   ca r r ied   o u u s in g   th ir t y   s i x   tr y p a n   b lu e - s ta in ed   m icr o s co p ic  i m a g es.  T h d eb r is   in   th i m a g e s   w a s   r e m o v ed   a f ter   ap p ly i n g   a n   i m a g e - g u id ed   f il ter   as  s h o w n   i n   Fi g u r e   4 .   As  w p er f o r m ed   co lo r   s p ac co n v er s io n ,   t h i m ag e s   b ased   o n   HSV  c h an n el s   ar s h o w n   i n   F ig u r e   5 .   I ca n   b s ee n   t h at  t h i m a g e   w it h   t h s atu r atio n   ch a n n el  as   s h o w n   i n   Fig u r e   5 b   g av b etter   co n tr ast  o f   liv ce lls   as  co m p ar ed   to   o th er   ch an n el s .   T h en   af ter   b r ig h t n e s s   ad j u s t m en t,  t h li v ce lls   b ec a m clea r l y   e x tr ac ted   f r o m   th b ac k g r o u n d   as   s h o w n   in   Fi g u r e   6 .   A s   w u s ed   Ots u s   t h r es h o ld in g   to   s e g m en th liv ce l ls   f r o m   t h b ac k g r o u n d   an d   th e   n u cle o f   li v ce lls   w er o p en e d   an d   d ilated   af ter   th th r es h o l d in g ,   t h r esu l o f   s e g m e n tat io n   s t ep   f o r   liv ce ll   is   d e m o n s tr ated   in   Fig u r e   7 a.   T h im a g s e g m e n tatio n   o f   d ea d   ce lls   af ter   u s i n g   t h h i s to g r a m   th r es h o ld in g   is   p r esen ted   in   Fi g u r e   7 b .   Af ter   th i m a g s eg m e n tatio n ,   t h i m ag e   w as   p r o ce s s ed   w it h   t h co u n ti n g   al g o r ith m   to   id en tify   a n d   co u n b o th   liv e   an d   d ea d   ce lls .   T h f in al  i m a g es  s h o w in g   th li v an d   d ea d   ce lls   id en tific atio n   ar r esp ec tiv el y   p r ese n ted   in   F ig u r e   8   an d   Fi g u r e   9.           Fig u r 4 E x a m p les o f   ( a o r ig in al  i m ag a n d   ( b i m a g a f ter   g u id ed   i m a g f ilter   p r o ce s s           Fig u r 5 I m a g es a f ter   HSV  co lo r   s p ac co n v er s io n :   ( a Hu c h an n el  i m a g e,   ( b Sat u r atio n   c h an n el  i m a g an d   ( c Valu c h an n el  i m a g e       Fig u r 6 Satu r atio n   c h an n el  im a g af ter   b r ig h t n es s   ad j u s tm en t   s h o w i n g   b etter   co n tr as t o f   li v e   ce lls   f r o m   th b ac k g r o u n d   Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
                      I SS N :   2 0 8 8 - 8708   I n t J   E lec  &   C o m p   E n g ,   Vo l.  9 ,   No .   4 A u g u s t   201 9   :   2 4 6 0   -   2468   2464   T h liv ce ll s   ar m ar k ed   with   y ello w   cir cle s   w h ile  t h d ea d   ce lls   ar m ar k ed   as  b l u cir cles .   As  s h o w n   in   Fig u r e   8 ,   it  w as   n o ticed   th at  s o m liv ce lls   co u ld   n o b d etec ted   an d   co u n t ed   d u to   th eir   n o n - d is tin ct iv n u cle i Fig u r 1 0   s h o w s   t h p lo o f   th n u m b er   o f   liv an d   d ea d   ce lls   co u n t ed   b y   o u r   ap p r o ac h   ag ain s t h a v er ag ed   r es u lt s   f r o m   m a n u al  co u n ti n g Ou r   ap p r o ac h   p r o v id ed   v er y   s i m i lar   co u n ti n g   r es u lt  o f   liv ce lls   to   th e x p er ts ’  co u n ti n g   r es u lt  w it h   h i g h   co r r elatio n   co ef f icie n ( r = 0 . 99 w h er ea s   co r r el atio n   co ef f icie n t i n   ca s o f   t h d ea d   ce lls   co u n ti n g   i s   0 . 74 .           Fig u r 7 I m a g a f ter   ap p ly in g   Ots u s   m et h o d   s h o w i n g   b lack   an d   w h ite  i m ag w i th   ( a liv ce ll s   an d   ( b d ea d   ce lls           Fig u r 8 E x a m p le  o f   i m a g s h o w in g   li v ce lls   d etec tio n   m a r k ed   w it h   y ello w   cir cle           Fig u r 9 E x a m p le  o f   i m ag s h o w in g   d ea d   ce lls   d etec tio n   m ar k ed   w it h   b lu cir cle   Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
I n t J   E lec  &   C o m p   E n g     I SS N:  2088 - 8708       Live  a n d   d e a d   ce lls   co u n tin g   f r o micro s co p ic  tr yp a n   b lu s ta in in g   ima g es u s in g     ( S u   Mo n   A u n g )   2465         Fig u r 1 0 C o r r elatio n   p lo ts   b et w ee n   t h co u n tin g   r es u lt s   b y   t h n e w   ap p r o ac h   an d   ex p er ts   f o r   ( a liv ce ll s   an d   ( b d ea d   ce lls       I n   co m p ar is o n   w i th   th e x p e r ts ,   th ac c u r ac y   p er ce n ta g es   o f   ce ll  co u n ti n g   f r o m   3 6   i m ag es  w er e   d eter m in ed W o b tain ed   8 3 ± 6 an d   6 3 ± 1 0 f o r   th a v er ag ac cu r ac y   o f   li v ce ll  co u n ti n g   a n d   d ea d   ce ll   co u n ti n g   r esp ec tiv el y W also   ca lcu lated   th av er ag ti m co n s u m p tio n   p er   im a g f r o m   ea ch   ex p er an d   o u r   ap p r o ac h   as  illu s tr ated   i n   Fi g u r 11 Ou r   ap p r o ac h   co n s u m ed   s h o r ter   ti m t h a n   m a n u al  c o u n ti n g   b y   e x p er ts .   I is   clea r ly   n o ticed   th a th er is   v ar iatio n   in   co u n t in g   t i m a m o n g   t h ex p er ts Fu r t h er m o r e,   Fig u r 1 2   d em o n s tr ate s   th a v er ag n u m b er   o f   li v a n d   to tal  ce lls   f r o m   m a n u al,   I m a g eJ   an d   p r o p o s ed   ap p r o ac h .   I s h o w s   t h at  o u r   p r o p o s ed   ap p r o ac h   h ad   th av er ag n u m b er   o f   li v ce lls   s li g h tl y   h ig h er   t h an   m a n u al   co u n ti n g   an d   it  w as  b etter   th a n   th I m ag eJ   u s i n g   C ellC o u n t in g Ma cr o 2 - v1 . 01 . ij m I n   ad d i tio n ,   o u r   ap p r o ac h   co u ld   d etec t th d ea d   ce lls   w h er ea s   I m ag eJ   w it h   C ell C o u n ti n g Ma cr o 2 - p l u g in   co u ld   n o t d o   th at .   W s h o w ed   t h at   th e   g u id ed   i m a g f ilter i n g   p r o v id ed   s m o o th   ed g m ai n te n a n ce   to   o u r   o b j ec ts ,   lead in g   to   b etter   q u alit y   in p u i m a g f o r   o u r   ap p r o ac h   [ 2 4 ] .   A s   o u r   r esu lt s ,   th ac cu r ac y   o f   li v ce lls   co u n ti n g ,   f o r   ea c h   i m a g e,   w a s   v er y   h i g h   ( >8 3 %)  d u to   th g o o d   co n tr ast  b et wee n   f o r eg r o u n d   a n d   b ac k g r o u n d   a f ter   p r ep r o ce s s in g   w it h   t h i m a g n o is e   r ed u ctio n   u s i n g   g u id ed   i m ag e   f i lter   an d   a   s at u r ated   ch an n el  [ 2 7 ] .   W e   ex p er ien ce d   s im ilar   h i g h   ac cu r ac y   o f   li v ce lls   co u n tin g   u s i n g   s i m ila r   s a m p le  i m a g es  in   o u r   p r ev io u s   w o r k   u s i n g   K - m ea n   c lu s ter in g   tec h n iq u [ 2 8 ] .   Ho w e v er ,   th i s   n e w   s i m p le   m et h o d   p r o v id ed   a   h ig h er   ac c u r ac y .   W it h   th is   ap p r o ac h ,   th b r ig h t n es s   o f   liv ce ll s   is   c lear l y   d i f f er en f r o m   t h i m ag e   b ac k g r o u n d ,   w h ic h   i s   d is ti n ct  ad v a n ta g f o r   i m a g t h r esh o ld in g   f o r   liv ce lls   d etec t io n .   P iccin i n an d   co lleag u e s   [ 1 4 ]   p r esen ted   h ig h   ac cu r ac y   o f   li v ce ll s   co u n ti n g   u s i n g   a n   a u to m a ted   i m a g m o s aic in g   tech n iq u f o r   A 5 4 9   an d   KKP   ce ll  li n es.  T h h i g h   ac c u r ac y   o f   li v ce ll   co u n ti n g   in   b o th   t h eir   r es u lts   an d   o u r s   p ar ticu lar l y   r elate s   to   th clea r l y   d is tin g u is h ab le  s h ap o f   liv ce lls   an d   g o o d   b a ck g r o u n d   co n tr ast.   Ho w e v er ,   s o m i m a g es  w c o u ld   n o co m p letel y   d etec all  liv ce lls   b ec au s th er w as  n eit h er   s tr u ct u r in   n u cle u s   n o r   s m aller   s tr u ctu r th an   o u r   v al u e s   o f   s tr u ct u r in g   elem e n t s   r ad iu s   in   n u cle u s .   T h is   ca u s ed   s o m e   i m a g es  g o a n   ac c u r ac y   les s   th a n   9 0 %.  Fu r t h er m o r e,   o u r   ap p r o ac h   d id   n o r eq u ir m an u al   t h r es h o ld in g   ad j u s t m e n t th er e f o r it r ed u ce d   ti m co n s u m i n g .           Fig u r 1 1 T im co n s u m p tio n   f o r   ce ll c o u n ti n g   m ea s u r ed   b y   t h r ee   ex p er ts   a n d   o u r   p r o p o s ed   ap p r o ac h       Fig u r 1 2 A   p lo t o f   t h a v er ag n u m b er   o f   li v e,   d ea d   an d   to tal  ce lls   co u n ted   b y   m a n u al   co u n ti n g ,   I m ag eJ   an d   o u r   ap p r o ac h       Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
                      I SS N :   2 0 8 8 - 8708   I n t J   E lec  &   C o m p   E n g ,   Vo l.  9 ,   No .   4 A u g u s t   201 9   :   2 4 6 0   -   2468   2466   Ou r   ap p r o ac h   p r o v id ed   less   n u m b er   o f   d ea d   ce lls   co m p a r ed   to   m an u al  co u n tin g   b y   t h ex p er ts .   T h is   m ig h h av b ee n   ca u s e d   b y   th i n ef f ec ti v e n es s   o f   d ea d   ce ll  s eg m e n tatio n I s h o u ld   b n o ted   th at  s eg m e n tatio n   r esu lts   d ep en d   o n   t h q u al it y   o f   p r ep ar atio n   a n d   th co lo r in g   o f   tr y p an   b lu e - s tain ed   m icr o s co p ic  i m a g es Ov er s tr ai n in g   a n d   p o o r   d ig itizatio n   ca n   ad v er s el y   a f f ec s e g m en ta tio n   r es u lt s   [ 29] T h ese  q u an d ar ies  in f r eq u en t l y   o cc u r   an d   ca n   b e   r e m ed ie d   w it h   m o r r ig o r o u s   q u alit y   co n tr o d u r in g   t h s a m p le  p r ep ar atio n   an d   i m a g ac q u i s itio n Mo r eo v er ,   d ea d   ce lls   f r o m   ap o p to s is   p r esen ted   in   f r ag m e n ts   ca n   lead   to   o v er   co u n ti n g   [ 30 ] .   T h er ef o r e,   th e   co u n ti n g   o f   d ea d   ce lls   s till   h as  er r o n eo u s   r es u lts   m u c h   m o r t h a n   li v ce ll s   co u n ti n g Fo r   ex a m p le,   t h a p p r o ac h   u s in g   a u to m ated   i m a g m o s aic k in g   h ad   f a ls p o s it iv r es u lt s   o n   d ea d   ce ll  co u n ti n g   co m p ar ed   to   th e   ex p er ts   m u c h   m o r th a n   t h l iv ce lls   co u n t in g   [ 14 ] .   I r e m ain s   c h alle n g to   i m p r o v t h ac cu r ac y   o f   d ea d   ce lls   co u n t in g   b y   i m p r o v in g   eit h er   i m a g n o is r ed u ctio n   o r   i m a g s eg m e n tatio n   a s   w ell  as c o u n ti n g   lo g ic  f o r   f r a g m en ted   d ea d   ce ll     C o m p ar in g   t h r es u lt s   o f   ce ll  co u n tin g   b et w ee n   o u r   ap p r o ac h   an d   I m a g eJ   w ith   au to m atic  ce l l   co u n ti n g   p lu g i n ,   o u r   ap p r o ac h   co u ld   g i v t h n u m b er   o f   b o t h   li v ce ll s   an d   d ea d   ce lls   w h er ea s   I m a g eJ   co u ld   d etec o n l y   li v ce lls T h is   in d icate s   th at  t h I m a g eJ   p lu g i n   f o r   au to m atic  ce ll  co u n ti n g   d o es  n o s er v o u r   tr y p an   b lu s tai n ed   i m a g es  a n d   r eq u ir e m en ts I s ee m s   I m ag eJ   co u ld   au to m atica ll y   co u n ce lls   w it h   g o o d   co n tr ast  b et w ee n   ce ll s   a n d   b ac k g r o u n d   t h er ef o r d ea d   ce lls   in   o u r   i m ag e s   ar q u ite  d i f f i cu lt  to   b d etec ted .   I m i g h b n ec ess ar y   to   d o   an   i m ag p r ep r o ce s s in g   f o r   o u r   i m ag e s   b ef o r an al y zi n g   w i th   I m a g eJ On   t h e   ot h er   h an d ,   o u r   ap p r o ac h   alr ea d y   i n cl u d ed   th i m a g p r e p r o ce s s in g   s u c h   as  n o is f ilt er in g   an d   co n tr as t   en h a n ce m en t to   i m p r o v th i m ag q u alit y   in   t h al g o r ith m   T h is   s tu d y   w a s   b ased   o n   o n l y   3 6   tr y p an   b lu e - s tai n ed   i m a g es   f r o m   o n ce ll  lin w h ich   co u l d   lim it   th e   g en er aliza tio n   o f   t h r es u lts   f o r   o th er   ce ll  lin es Fu r th er m o r e,   th er w er s e v er al  li m itati o n s   w h ich   a f f ec ted   th co u n ti n g   ac c u r ac y Fo r   ex a m p le,   w a s s u m ed   th at  t h c ell  d ia m eter s   i n   all  i m ag e s   wer ab o u th s a m e   s ize,   w h ile  i n   f ac t h d ea d   ce lls   in   o u r   s t u d y   h ad   v ar io u s   d ia m eter s ,   esp ec iall y   w h e n   t h ce lls   co u n ted   b y   o u r   ap p r o ac h   w as   g r ea ter   t h a n   t h e   r esu lt s   co u n ted   b y   t h ex p er t s T h q u alit y   o f   i m ag e   also   a f f ec ts   o u r   co u n ti n g   s u c h   as  th b r ig h t n es s   o f   th i m a g b ac k g r o u n d Fu r th er m o r e,   lo w   co n tr ast  ca n   i n f l u en ce   th i m ag e   s eg m e n tatio n   an d   lead   to   lo wer   ac cu r ac y   o f   ce ll   co u n ti n g As  o u r   tr y p an   b lu e - s ta in ed   m icr o s co p ic  i m ag e s   h av d ar k   b ac k g r o u n d ,   th c o lo r   o f   th d ea d   ce lls   is   q u ite  s i m ilar   to   th b ac k g r o u n d ,   w h ich   r eq u ir es  s e v er al  tr ials   f o r   d e ad   ce lls   s eg m e n tati o n Mo r eo v er ,   w ap p lied   m ea n   t h r esh o ld   v al u b ased   o n   3 6   im a g e s   f o r   d ea d   ce lls   s e g m e n tatio n ,   th u s   it  is   n ec es s ar y   to   r ec alc u late   th e   m ea n   t h r esh o ld   v al u i f   t h n u m b er   o f   i m a g es  o r   i m a g b ac k g r o u n d   i s   ch a n g ed I n   ad d itio n ,   e m p lo y in g   a   lar g s tr u ct u r in g   ele m e n t c a n   o v er s i m p li f y   t h i m ag e,   w h ile  u s in g   to o   s m al s tr u ctu r in g   ele m e n d o es  n o al w a y s   p r o d u ce   d esira b le  r esu l ts   as   m a n y   o f   th e   s u b s tr u ct u r es  w it h i n   th lar g e   n u clei  r e m ai n ,   af f ec ti n g   th s eg m e n tatio n   p er f o r m an ce T h er ef o r e,   o p t i m u m   p ar am eter s   s h o u ld   b d eter m i n ed   s u c h   as t h r es h o ld   v al u an d   r ad iu s   o f   s tr u ct u r i n g   ele m e n t .       4.   CO NCLU SI O N     I n   th i s   s t u d y ,   w p r esen a   co m p u ter - a s s i s ted   ce ll  co u n ti n g   ap p r o ac h   o n   tr y p an   b lu e - s tai n ed   m icr o s co p ic  i m ag e s   o f   b r ea s ca n ce r   ce ll  l in e.   T h r es u lt s   o f   ce ll  co u n ti n g   f r o m   th e   tr y p a n   b l u e - s tai n e d   m icr o s co p ic  i m a g es  u s i n g   o u r   ap p r o ac h   ac h iev ed   r e m ar k ab le  ac cu r ac y   co m p ar ed   to   th r ee   ex p er ts ,   esp ec iall y   i n   co u n t in g   th n u m b er   o f   li v ce lls .   Ou r   s i m p le  m et h o d   co u ld   id en tify   o v er lap p in g   ce lls   a n d   co u n t   th e m   co r r ec tl y .   T h is   a u to m ate d   co u n tin g   ap p r o ac h   is   b en e f ic ial  to   b io lo g is ts   an d   b io m ed ica l r esear ch er s .       ACK NO WL E D G E M E NT S   T h au t h o r s   w o u ld   li k to   ac k n o w led g t h T h aila n d ' s   E d u ca tio n   H u b   f o r   t h e   So u t h er n   R e g io n   o f   ASE A C o u n tr ies  ( T E H - AC s ch o lar s h ip   g iv e n   to   M s Su   Mo n   A u n g   f r o m   t h Gr ad u a te   Sch o o l,  P r in ce   o f   So n g k la  U n i v er s it y W w o u l d   lik to   th an k   A s s o ciate   P r o f ess o r   P o r n ch ai  P h u k p attar a n o n f r o m   th Fac u lt y   o f   E n g i n ee r in g ,   P r in ce   o f   So n g k la   U n iv er s it y   f o r   ad v ice  o n   i m a g p r o ce s s i n g W ap p r ec iated   o u r   tech n ica l   d is cu s s io n s   w it h   Ms A d eli n e   Ver el  an d   Ms P am i n B er n o u ,   in ter n s h ip   s t u d en t s   f r o m   T elec o m   P h y s iq u e   Stra s b o u r g ,   Fra n ce W also   th an k   t h I n ter n at io n al  Af f air s   O f f ice   o f   t h Fac u lt y   o f   M ed icin e,   P r in ce   o f   So n g k la  U n i v er s it y   f o r   ed itin g   th E n g lis h   o f   t h m an u s cr ip t .       RE F E R E NC E S   [ 1   J . Y F a n g ,   e a l ,   F ro m   c o m p e ten c y   to   d o rm a n c y a   3 D   m o d e t o   st u d y   c a n c e c e ll a n d   d r u g   re sp o n siv e n e ss ,”     J o u rn a o tra n sla t io n a me d icin e ,   1 4 ;   38 ,   2 0 1 6 .     [ 2   S . W F e sik ,   P ro m o ti n g   a p o p t o sis  a a   stra te g y   f o c a n c e d r u g   d isc o v e r y ,”   Na t u re   Rev iews   Ca n c e r ,   5 ( 1 1 ) ;     876 - 8 8 5 2 0 0 5 .   Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
I n t J   E lec  &   C o m p   E n g     I SS N:  2088 - 8708       Live  a n d   d e a d   ce lls   co u n tin g   f r o micro s co p ic  tr yp a n   b lu s ta in in g   ima g es u s in g     ( S u   Mo n   A u n g )   2467   [ 3   Y Ko n d o ,   T h e   ro le   o f   a u to p h a g y   in   c a n c e d e v e lo p m e n a n d   re s p o n se   to   th e ra p y ,”   Na tu re   Rev ie ws  Ca n c e r ,   5 (9 );   726 - 7 3 4 2 0 0 5 .   [ 4   S . W L o we   a n d   A . W L in , “ A p o p to sis  in   c a n c e r ,”   Ca rc in o g e n e sis .   2 1 ( 3 );  4 8 5 - 4 9 5 2 0 0 0 .   [ 5   A . E Ca rp e n ter,  e a l . ,   Ce ll P r o f il e r ima g e   a n a l y sis  so f t w a re   f o id e n ti fy in g   a n d   q u a n t ify in g   c e ll   p h e n o ty p e s ,”   Ge n o me   Bi o l o g y ,   7 ( 1 0 ),   R1 0 0 2 0 1 6 .   [ 6   J S c h in d e li n ,   e a l . ,   F ij i a n   o p e n - so u rc e   p latf o rm   f o b io lo g ica l - ima g e   a n a l y sis ,”   Na tu re   M e th o d s ,   9 (7 );   6 7 6 - 682 2 0 1 2 .   [ 7 ]   J S e li n u m m i,   e a l . ,   S o f tw a re   f o q u a n ti f ica ti o n   o f   lab e led   b a c teria   f ro m   d ig it a m icro sc o p e   im a g e s   b y   a u to m a ted   im a g e   a n a l y sis ,”   Bi o T e c h n i q u e s ,   3 9 ( 6 ),   8 5 9 - 8 6 2 2 0 0 5 .   [ 8   I . V Grish a g in   A u t o m a ti c   c e ll   c o u n ti n g   w it h   Im a g e ,   An a lytica l   Bi o c h e mistry 4 7 3 ;   6 3 - 65 ,   2 0 1 5 .   [ 9   J . P V a y r y n e n ,   e a l. ,   A n   im p ro v e d   ima g e   a n a l y sis  m e th o d   f o c e ll   c o u n ti n g   len d c re d ib i li ty   to   th e   p r o g n o stic   sig n if ica n c e   o f   T   c e ll s in   c o lo re c tal  c a n c e r ,”   Vi rc h o ws Arc h iv ,   4 6 0 ( 5 ) ,   4 5 5 - 4 6 5 2 0 1 2 .   [ 10   R . J Blatt,   e a l. ,   A u to m a t e d   q u a n ti tativ e   a n a ly si s o f   a n g io g e n e sis  in   th e   ra a o rta m o d e u sin g   Im a g e - P r o   P lu 4 . 1,   Co mp u ter   M e th o d a n d   Pro g ra m s in   Bi o me d icin e ,   7 5 (1 ) ,   75 - 79 ,   2 0 0 4 .   [ 11 ]   P . J Na ra y a n ,   e a l. ,   Hig h   th ro u g h p u q u a n ti f ica ti o n   o f   c e ll w it h   c o m p lex   m o rp h o lo g y   in   m ix e d   c u l tu re s ,”   J o u rn a l   o n e u ro sc ien c e   me th o d s ,   1 6 4 ( 2 ) ,   339 - 3 4 9 2 0 0 7 .   [ 12 ]   D S u i,   e a l . ,   Brig h f ield   m icro sc o p ic  c e ll c o u n ti n g   m e th o d   f o BEV S   u sin g   n o n li n e a c o n v e rg e n c e   in d e x   slid in g   b a n d   f il ter ,”   Bi o me d ica l   En g in e e r in g   O n li n e 1 3 (1 ) 1 4 7 2 0 1 4 .   [ 13   S Na z li b il e k ,   e a l ,   A u to m a ti c   s e g m e n tatio n ,   c o u n ti n g ,   siz e   d e ter m in a ti o n   a n d   c las sif ica ti o n   o f   w h it e   b l o o d   c e ll s ,”   M e a su re me n t ,   55 ,   58 - 65 2 0 1 4 .   [ 14   F P icc in i n i,   e a l ,   Im p ro v in g   re li a b il it y   o li v e / d e a d   c e ll   c o u n ti n g   th ro u g h   a u t o m a ted   i m a g e   m o sa ick in g ,”   Co mp u ter   M e th o d a n d   Pro g ra m s in   Bi o me d icin e 1 1 7 ( 3 ) ,   4 4 8 - 463 2 0 1 4 .   [ 15   A M o u e lh i,   e a l. ,   A u to m a ti c   ima g e   s e g m e n tatio n   o f   n u c lea sta in e d   b re a st  ti ss u e   se c ti o n u si n g   c o lo a c ti v e   c o n to u m o d e a n d   a n   im p ro v e d   w a t e rsh e d   m e th o d ,”   Bi o me d ica l   S ig n a Pro c e ss in g   a n d   Co n tro l ,   8 (5 ),   4 2 1 - 436 2 0 1 4 .   [ 16   Y Zh u   a n d   C Hu a n g ,   A n   im p ro v e d   m e d ian   f il terin g   a lg o rit h m   fo im a g e   n o ise   re d u c ti o n ,”   Ph y sic Pro c e d ia ,   25 ,   609 - 6 1 2 2 0 1 2 .   [ 17 ]   T S o n a n d   N Ra th o r ,   Re m o v a l   o f   Hig h   De n sit y   I m p u lse   No ise   u sin g   Ef f i c ien M e d ian   F il ter  f o Dig it a I m a g e ,”   In ter n a t io n a J o u rn a o C o mp u ter   Ap p l ica ti o n s ,   1 1 5 (5 ) ,   25 - 31 2 0 1 5 .   [ 18 ]   H Zen g ,   e a l . ,   A n   im p ro v e d   a lg o rit h m   f o im p u lse   n o ise   b y   m e d ian   f il ter ,”   AA S RI  Pr o c e d ia ,   1 ,   68 - 73 ,   2 0 1 2 .   [ 19 ]   C S u n ,   e a l . ,   A n   e ff icie n m e th o d   f o sa lt - a n d - p e p p e n o ise   r e m o v a b a se d   o n   s h e a rlet  tran sf o rm   a n d   n o ise   d e tec ti o n ,”   AEU - In ter n a ti o n a J o u rn a l   o f   El e c tro n ics   a n d   Co mm u n ica ti o n s ,   6 9 ( 1 2 ) 1 8 2 3 - 1 8 3 2 2 0 1 5 .   [ 20   A . K S a m a n tara y   a n d   P M a ll ick ,   De c isio n   Ba se d   A d a p ti v e   Ne ig h b o r h o o d   M e d ian   F i lt e r ,”   Pro c e d ia   C o mp u ter   S c ien c e ,   48 ,   2 2 2 - 2 2 7 2 0 1 5 .   [ 21 ]   N . H M a h m o o d   a n d   M . A M a n so r ,   Re d   b lo o d   c e ll e stim a ti o n   u sin g   Ho u g h   tran sf o rm   tec h n iq u e ,”   S ig n a &   Ima g e   Pro c e ss in g ,   3 (2 ) ,   53   2 0 1 2 .   [ 22 ]   L . H L ie w ,   e a l. ,   Ce ll   d e tec ti o n   fo b e e   c o m b   ima g e u sin g   c irc u la H o u g h   tr a n sf o rm a ti o n ,”   S c ien c e   a n d   S o c ial  Re se a rc h   ( CS S R ) .   Ku a la L u m p u r,   M a lay sia 191 - 1 9 5 2 0 1 0 .   [ 23 ]   S Ha o ,   e a l. ,   Im a g e   d e tail  e n h a n c e m e n w it h   sp a ti a ll y   g u id e d   f il ters ,”   S ig n a Pr o c e ss in g ,   1 2 0 ,   7 8 9 - 7 9 6 2 0 1 6 .   [ 24 ]   K He ,   e a l . ,   G u id e d   Im a g e   F il terin g , ”  IEE T r a n sa c ti o n s   o n   P a tt e rn   An a lys is  a n d   M a c h in e   I n tel li g e n c e ,   3 5 ( 6 ) ,   1 3 9 7 - 1 4 0 9 ,   2 0 1 3 .   [ 25   N Otsu ., “ A   t h re sh o ld   se lec ti o n   m e th o d   f ro m   g ra y - lev e h isto g ra m s ,”   Au to ma ti c a 11 ,   23 - 27 ,   1 9 7 5 .   [ 26 ]   M V e ta,  e a l. ,   A u to m a ti c   n u c lei  se g m e n tatio n   i n   H& sta in e d   b re a st  c a n c e h isto p a t h o l o g y   i m a g e s ,”   PL o S   On e ,   8 (7 ),   e 7 0 2 2 1 ,   2 0 1 3 .   [ 27 ]   P Ch o u d h ry ,   Hig h - T h ro u g h p u t   M e th o d   f o A u to m a ted   Co lo n y   a n d   Ce ll   C o u n ti n g   b y   Dig it a Im a g e   A n a l y sis  Ba se d   o n   E d g e   De tec ti o n ,”   PL o S   On e ,   1 1 (2 ) ,   e 0 1 4 8 4 6 9 2 0 1 6 .   [ 28 ]   F Ch o b n g a m ,   e a l. ,   P re li m in a ry   re su lt o f   d e a th   c e ll   c o u n ti n g   b a se d   o n   K - m e a n   c lu ste rin g ,”   T h e   5 th   2 0 1 2   Bi o me d ica l   En g in e e rin g   I n ter n a t i o n a Co n fer e n c e   ( BM Ei CON ) ,   U b o n   Ra tch a th a n i,   T h a il a n d ,   1 - 4 2 0 1 2 .   [ 29 ]   Y Ya g a n d   J . R G il b e rtso n ,   Dig it a ima g in g   in   p a th o l o g y th e   c a se   f o sta n d a rd iza ti o n ,”   J o u rn a l   o T e lem e d icin e   a n d   T e lec a re ,   1 1 (3 ) ,   1 0 9 - 1 1 6 ,   2 0 0 5 .   [ 30 ]   Y . H Ch o a n d   Y . H Yo o ,   T a x o l - in d u c e d   g ro w th   a rre st  a n d   a p o p to sis  is  a ss o c iate d   w it h   th e   u p r e g u latio n   o f   th e   Cd k   in h ib it o r,   p 2 1 W A F 1 / CIP 1 ,   i n   h u m a n   b re a st ca n c e c e ll s ,     On c o lo g y   Rep o rts ,   2 8 (6 ),   2 1 6 3 - 2 1 6 9 2 0 1 2 .       B I O G RAP H I E S   O F   AUTH O RS        S u   M o n   A u n g   re c e iv e d   h e b a c h e lo d e g re e   o f   te c h n o l o g y   a n d   b a c h e lo d e g re e   o f   e n g in e e rin g   f ro m   M a n d a lay   T e c h n o lo g ica Un iv e rsity ,   M y a n m a in   2 0 1 2   a n d   2 0 1 3   r e sp e c ti v e l y No w ,   sh e   is  stu d y in g   a   m a ste d e g re e   in   Bio m e d ica En g in e e rin g   a F a c u l ty   o f   M e d icin e ,   P rin c e   o f   S o n g k la  Un iv e rsit y S h e   w a a w a rd e d   f o T h a il a n d Ed u c a ti o n   Hu b   f o A S EA c o u n tri e ( T E H - AC sc h o lars h ip   f o r   M a ste De g re e   P r o g ra m   ( 2 0 1 5 - 2 0 1 7 )         Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.
                      I SS N :   2 0 8 8 - 8708   I n t J   E lec  &   C o m p   E n g ,   Vo l.  9 ,   No .   4 A u g u s t   201 9   :   2 4 6 0   -   2468   2468     K a n y a n a tt  K a n o k w iro o n   re c e i v e d   th e   B . Sc d e g re e   ( w it h   h o n o rs in   Bi o tec h n o lo g y   in   2 0 0 0   a n d   Ph . D d e g re e in   Bio c h e m istr y   f r o m   P rin c e   o f   S o n g k la  Un iv e rsity ,   Ha Ya i,   S o n g k h la,  T h a il a n d   in   2 0 0 7 S h e   sta rted   h e c a re e a a   lec tu re a F a c u lt y   o f   S c ien c e   a n d   In d u str ial  T e c h n o lo g y ,   P rin c e   o f   S o n g k la  Un iv e rsity ,   S u ra t   T h a n Ca m p u in   2 0 0 8 S h e   is   c u r re n t ly   a n   A ss istan P ro f e ss o a t   De p a rtme n o f   Bio m e d ica S c ie n c e s,  F a c u lt y   o f   M e d icin e ,   P ri n c e   o f   S o n g k la  Un iv e rsit y He r   re se a rc h   in tere sts  c o v e th e   m o lec u lar  m e c h a n is m   a n d   b io m a rk e r   id e n ti f ica ti o n   o f   b re a s t   tu m o rig e n e sis in   b re a st ca n c e r         To n g h a t h a i   Ph a ira t a n a   re c e iv e d   h e B . Sc in   P h y sic in   2 0 0 9   f ro m   P rin c e   o f   S o n g k la  Un iv e rsity ,   T h a il a n d S h e   w a a wa rd e d   M . Sc in   2 0 1 1   u n d e th e   s u p e rv isio n   o f   P ro f M o l ly   S tev e n a n d   P h i n   2 0 1 6   u n d e th e   d irec ti o n   o f   P r o f M a rty n   Bo u telle  in   Bio m e d ica En g in e e rin g   f ro m   I m p e rial  Co ll e g e   L o n d o n ,   U n it e d   Kin g d o m S h e   is   c u rre n tl y   a   lec tu re a n d   a   re se a rc h e a t h e   I n stit u te   o f   Bio m e d ica l   En g in e e rin g ,   F a c u lt y   o f   M e d icin e ,   P ri n c e   o f   S o n g k la  Un iv e rsity ,   S o n g k h la,  T h a il a n d He c u rre n t   re se a rc h   in tere sts  f o c u o n   e lec tr o c h e m ica b io se n so rs  a n d   m icr o f lu id ics   f o th e   d e v e lo p m e n o f   c li n ica d iag n o st ic sy st e m s a n d   p h y sio lo g ica m o n it o ri n g   in   re a l - ti m e .           S u r a p o n g   Cha t p u n   re c e iv e d   h is  B En g   in   M e c h a n ica E n g in e e rin g   in   1 9 9 6   f ro m   Ch u lalo n g k o rn   Un iv e rsit y ,   T h a il a n d He   re c e i v e d   h is  M En g   in   M e c h a n ica En g in e e rin g   in   2 0 0 3   f ro m   Un iv e rsit y   o T o k y o ,   Ja p a n He   w a a wa rd e d   P h . D in   Bio e n g in e e rin g   f ro m   U n iv e rsity   o f   Ca li f o rn ia,  S a n   Die g o ,   Un it e d   S tate He   jo in e d   th e   In st it u te  o f   Bio m e d ica En g in e e rin g ,   F a c u lt y   o f   M e d icin e ,   P r i n c e   o f   S o n g k la  Un iv e rsit y   a a   lec tu re r   in   2 0 1 0 No w ,   h e   is  a n   a ss ista n p r o f e ss o r His  c u rre n re se a r c h   in tere sts  in c lu d e   c a rd i o v a sc u lar  e n g in e e rin g ,   b i o m e c h a n ics ,   i m a g e   a n d   sig n a a n a ly sis  a n d   m e d ica d e v ice s .     Evaluation Warning : The document was created with Spire.PDF for Python.